Πληροφορίες

Οι διαλυμένες πρωτεΐνες θα περάσουν από ένα φίλτρο 0,2 micron;

Οι διαλυμένες πρωτεΐνες θα περάσουν από ένα φίλτρο 0,2 micron;


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Δεδομένου ότι μπορεί να υπάρχουν εξαιρέσεις, μπορείτε συνήθως να περιμένετε να περάσει η πρωτεΐνη;


Πολλές πρωτεΐνες θα περάσουν από ένα φίλτρο 0,2 micron. Εάν οι πρωτεΐνες συσσωματωθούν ή αν κολλήσουν στο υλικό του φίλτρου επειδή είναι φορτισμένο, μπορεί να μην γίνουν.

Εκτός από τα παραπάνω, ένα φίλτρο 0,2 micron θα επιτρέψει τη διέλευση πρωτεϊνών έως 200 kd. Υπάρχουν κάποιες πρωτεΐνες που είναι μεγαλύτερες.

Επεξεργασία με κάποιο πηγαίο υλικό.

Ωραία παρουσίαση για τα μεγέθη των πόρων και τις μεμβράνες εδώ

Γραφικό από αυτήν την παρουσίαση:


Καθορισμός μεγέθους πόρων και στείρο φιλτράρισμα 0,2 Micron έναντι 0,22 Micron. Ποιά είναι η διαφορά?

Εάν επρόκειτο να αφιερώσετε λίγο χρόνο μελετώντας την επιλογή των φίλτρων δίσκων μεμβράνης της Sterlitech, ένα πράγμα για το οποίο είμαστε πολύ περήφανοι θα μπορούσε απλώς να σας εκπλήξει: έχουμε πολλά μεγέθη πόρων. Τόσα πολλά που ίσως αναρωτιέστε αν είναι λίγο υπερβολικό το ότι φέρουμε μεγέθη πόρων 0,2 και 0,22 micron. Εξάλλου, και τα δύο χρησιμοποιούνται για την αποστείρωση υγρού που περνά μέσα από αυτά. Μπορεί η μικροσκοπική διαφορά των 0,02 microns να αλλάξει πραγματικά τόσο πολύ τα χαρακτηριστικά απόδοσης ενός φίλτρου;

Για να απαντήσουμε σε αυτήν την ερώτηση, πρέπει πρώτα να ρίξουμε μια ματιά σε μία από τις μεθόδους που χρησιμοποιούνται για τον έλεγχο της απόδοσης ενός φίλτρου: τη δοκιμή του σημείου φούσκας1. Οι τυπικές δοκιμές για την επαλήθευση του δηλωμένου μεγέθους πόρων ενός φίλτρου συνήθως συνεπάγονται μια δοκιμή σημείου φυσαλίδας. Αυτή η δοκιμή σπρώχνει τον αέρα υπό πίεση μέσω μιας βυθισμένης μεμβράνης (είτε σε νερό είτε σε οινόπνευμα) μέχρι το σημείο όπου οι φυσαλίδες αέρα αρχίζουν να περνούν αρχικά μέσω της μεμβράνης του φίλτρου2. Ο μεγαλύτερος πόρος, ή οι πόροι, στη μεμβράνη θα σχηματίσει φυσαλίδες πρώτα και η πίεση του αέρα που απαιτείται για την ώθηση των φυσαλίδων μέσα από αυτούς τους πόρους μπορεί να συσχετιστεί μαθηματικά με το μέγεθος των πόρων. Η ακανόνιστη και μπερδεμένη φύση των πόρων των περισσότερων φίλτρων μεμβράνης καθιστά αδύνατη την άμεση μέτρηση του μεγέθους ενός μεμονωμένου πόρου, επομένως η δοκιμή σημείου φυσαλίδας χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του μικρότερου σωματιδίου που μπορεί να αφαιρέσει το φίλτρο από ένα ρευστό.

Με άλλα λόγια, το δηλωμένο μέγεθος πόρων του φίλτρου δεν είναι κυριολεκτικά το μέγεθος των πόρων. Είναι μια βαθμολογία του τι δεν μπορεί να περάσει από αυτά. Προφανώς, κατά την αποστείρωση διαλυμάτων, το αντικείμενο είναι η φυσική απομάκρυνση των βακτηρίων που αιωρούνται στο διάλυμα. Πριν γίνουν τα φίλτρα 0,2 και 0,22 micron, θεωρήθηκε ότι τα φίλτρα με απόλυτη βαθμολογία 0,45 micron θεωρούνταν επαρκή για την καταπόνηση ακόμη και των μικρότερων βακτηρίων. Ωστόσο, η ανακάλυψη του Brevundimonas diminuta, έδειξε ότι εξακολουθούσαν να υπάρχουν βακτήρια ικανά να περάσουν από φίλτρο 0,45 micron σε μεγάλες ποσότητες. Μετά την ανακάλυψη, ερευνητές και εργαστήρια ανταγωνίστηκαν για τη δημιουργία του νέου προτύπου διήθησης, ορίζοντας αυθαίρετα τα φίλτρα τους να έχουν μέγεθος πόρων είτε 0,2 είτε 0,22 micron, περίπου το μισό μέγεθος από το παλιό πρότυπο.

Αυτό σημαίνει ότι, για σκοπούς αποστείρωσης, τα φίλτρα 0,2 micron και 0,22 micron δεν διακρίνονται. Η απόδοσή τους είναι η ίδια, μόνο που η διαφορά είναι ο προσδιορισμός της βαθμολογίας μεγέθους πόρων τους. Το πραγματικό μέτρο της ικανότητας του φίλτρου να αποστειρώνει υγρό είναι να περάσει τη δοκιμή που περιγράφεται στο ASTM F838-05, Πρότυπη μέθοδος δοκιμής για τον προσδιορισμό της κατακράτησης βακτηρίων των φίλτρων μεμβράνης που χρησιμοποιούνται για τη διήθηση υγρών. Βασικά, εάν το φίλτρο μπορεί να διατηρήσει τουλάχιστον 1 x 107 μονάδες σχηματισμού αποικιών (cfu) ανά cm2 ενός βακτηρίου πρόκλησης (συνήθως B.diminuta5), τότε το φίλτρο είναι κατάλληλο για χρήση για αποστείρωση.

Ακόμη και με τη συστολή του τυπικού μεγέθους πόρων για αποστείρωση, αποδεικνύεται ότι η απλή επιλογή μεγέθους δεν είναι επαρκής μέθοδος για να περιέχει πλήρως όλα τα σωματίδια. Jornitz6 et al. έδειξε ότι τα προσροφητικά αποτελέσματα αλλάζουν επίσης τον τρόπο με τον οποίο διαφορετικά μέσα φίλτρου συλλαμβάνουν διαφορετικά σωματίδια. Επιδράσεις όπως το pH, η πίεση, το βακτηριακό φορτίο και το ίδιο το υγρό μέσο επηρεάζουν το μέγεθος των βακτηρίων. Ωστόσο, εφόσον τα φίλτρα μπορούν να συλλάβουν τον απαιτούμενο αριθμό βακτηρίων πρόκλησης ανά τετραγωνικό εκατοστό μεμβράνης, τότε είναι ένα έγκυρο φίλτρο αποστείρωσης - ανεξάρτητα από το δηλωμένο μέγεθος πόρων. Η Sterlitech Corporation είναι ταυτόχρονα κατασκευαστής και μεταπωλητής διαφορετικών φίλτρων μεμβράνης, επομένως θα δείτε 0,2 micron και 0,22 micron στις προσφορές φίλτρων μας, αλλά για αποστειρωμένο φιλτράρισμα, και τα δύο είναι κατάλληλα με βάση τις παραπάνω πληροφορίες.


Ανόητη ερώτηση: είναι το DMSO αποστειρωμένο από μόνο του, για να το προσθέσω στα κύτταρα; - Μπουκάλι αποθέματος εργαστηρίου θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί; (Αυγ/22/2005 )

Απλώς αναρωτιέμαι, θα μπορούσα να χρησιμοποιήσω για την κατάψυξη κυττάρων DMSO, το οποίο βρίσκεται στο εργαστηριακό κέλυφος, ή θα έπρεπε να αγοράσω ένα νέο μπουκάλι και να το χρησιμοποιήσω μόνο για κυτταρική καλλιέργεια, ή θα μπορούσα να αποστειρώσω το DMSO;

Δεν νομίζω ότι είναι πιθανό να υπάρχουν πολλά που θα μπορούσαν να αναπτυχθούν στο DMSO, ωστόσο, για να είστε ασφαλείς, θα πρέπει να αγοράσετε ένα μπουκάλι μόνο για κυτταρική καλλιέργεια. Διαφορετικά, μπορείτε να το φιλτράρετε και να το αποστειρώσετε με ένα φίλτρο 0,2 micron, αλλά είναι αρκετά παχύ, οπότε μπορεί να γίνει λίγη προσπάθεια.

Δεν νομίζω ότι είναι πιθανό να υπάρχουν πολλά που θα μπορούσαν να αναπτυχθούν στο DMSO, ωστόσο, για να είστε ασφαλείς, θα πρέπει να αγοράσετε ένα μπουκάλι μόνο για κυτταρική καλλιέργεια. Διαφορετικά, μπορείτε να το φιλτράρετε και να το αποστειρώσετε με ένα φίλτρο 0,2 micron, αλλά είναι αρκετά παχύ, οπότε μπορεί να γίνει λίγη προσπάθεια.

Όταν ήμουν άπειρος, ένα από τα πολύ λάθη μου ήταν να φιλτράρω το αποστειρωμένο DMSO χωρίς να το αραιώσω. Προς τρόμο μου, το φίλτρο διαλύθηκε! Έτσι, αυτό που κάνω τώρα είναι να αραιώσω το DMSO (για κοινή εργαστηριακή χρήση θα πρέπει να είναι εντάξει) στο μέσο καλλιέργειας για να επιτύχω την τελική συγκέντρωση και, στη συνέχεια, να αποστειρώσω το μείγμα με διήθηση. Απλά μερικές συμβουλές σε περίπτωση που σχεδιάζατε να το φιλτράρετε κατευθείαν.

Μόλις αποστείρωσα το DMSO στο 121℃ για 30 λεπτά

Για την αποστείρωση με φίλτρο DMSO, συνιστάται η χρήση φίλτρων με νάιλον μεμβράνη (0,2 u), είναι ασφαλή για DMSO.

Συνήθως αποστειρώνουμε το 'μέσο κατάψυξης' που περιέχει DMSO. Αυτό γίνεται χρησιμοποιώντας φίλτρο 0,2 Um - "STERIFLIP"

Νομίζω ότι είναι καλό να φιλτράρουμε γιατί, κάποτε βρήκα κάτι να επιπλέει στο μέσο κατάψυξης όταν προσπάθησα να το χρησιμοποιήσω ως τέτοιο. Στη συνέχεια, έλεγξα το DMSO - υπήρχαν μερικά σωματίδια που επιπλέουν - ακριβώς όπως στο FBS!

Μέχρι στιγμής δεν έχω ακούσει ποτέ κανέναν οργανισμό να αναπτύσσεται σε καθαρό DMSO.

Δεν χρειάζεται να αποστειρώσετε το DMSO και δεν θα φιλτράριζα τον καθαρό διαλύτη. Αλλά θα πρέπει να φιλτράρετε το διάλυμα μέσου/DMSO.

Το μόνο πρόβλημα με το DMSO που είχα ποτέ είναι ότι ένα παλιό μπουκάλι 'οξειδώθηκε' από το οξυγόνο του αέρα. Τότε έχετε προβλήματα με το pH. Ελέγχετε λοιπόν πάντα το pH του μέσου σας (χρώμα δείκτη).


Λειτουργία φίλτρου micron

Φίλτρα για ενδοφλέβια (IV) χορήγηση φαρμάκων χρησιμοποιούνται για την απομάκρυνση μολυσματικών ουσιών από ενδοφλέβια προϊόντα. Αυτό το φιλτράρισμα προορίζεται να προστατεύσει τον ασθενή που λαμβάνει το φάρμακο φιλτράροντας τα σωματίδια, τα βακτήρια και τις εμβολές αέρα, προστατεύοντας τον ασθενή από φλεβίτιδα λόγω σωματιδίων ή μόλυνση λόγω βακτηρίων.

Τα φίλτρα χρησιμοποιούνται με την ενδοφλέβια χορήγηση πολλών φαρμάκων. Αυτά τα φίλτρα μπορεί να περιέχονται σε μια γραμμή IV (in-line φίλτρο) και είναι διαθέσιμα σε διάφορα μεγέθη. Ένα φίλτρο 5 μικρών αφαιρεί μεγάλα σωματίδια που μπορεί να έχουν εισαχθεί κατά την προετοιμασία του προϊόντος, όπως σωματίδια γυαλιού από γυάλινες αμπούλες. Το φίλτρο 0,22 micron είναι ένα από τα μικρότερα που χρησιμοποιούνται στη φροντίδα ασθενών και απομακρύνει τα βακτήρια. Αυτήν τη στιγμή δεν υπάρχουν φίλτρα που αφαιρούν ιούς.

Δεν πρέπει όλα τα ενδοφλέβια φάρμακα να χορηγούνται μέσω φίλτρου, ενώ άλλα μπορεί να απαιτούν φίλτρα συγκεκριμένου μεγέθους. Τα μόρια ορισμένων φαρμάκων μπορεί να είναι πολύ μεγάλα για να περάσουν μέσα από ένα φίλτρο ή μπορεί διαφορετικά να συνδεθούν στο φίλτρο και να αφαιρεθούν. Επομένως, είναι σημαντικό να συμβουλευτείτε τις πολιτικές του ιδρύματός σας για λεπτομέρειες σχετικά με το ποια φάρμακα απαιτούν φίλτρο για παρεντερική χορήγηση.


Διαδικασία

Χρήση MWGF200 για χρωματογραφία διήθησης γέλης

    Ρυθμιστικό διάλυμα και ρητίνη – Συνιστάται η χρήση 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, με 100 mM KCl ως ρυθμιστικό διάλυμα εξισορρόπησης με στήλη Sephacryl ® S-200-HR (Αρ. Καταλόγου S200HR) 90 cm x 1,6 cm στο 2– 8 °C. Για πληροφορίες σχετικά με την προετοιμασία της ρητίνης, τη συσκευασία στηλών και την εξισορρόπηση, επικοινωνήστε με το Τεχνικό Σέρβις.

1,0 στο κλάσμα κορυφής. Προστίθεται γλυκερίνη για να αυξηθεί η πυκνότητα του διαλύματος, αλλά η χρήση της είναι προαιρετική.

Ο συνιστώμενος όγκος δείγματος είναι μικρότερος από το 2% του συνολικού όγκου της κλίνης γέλης. Εφαρμόστε προσεκτικά το δείγμα μπλε δεξτράνης στη στήλη (αποφύγετε να διαταράξετε την επιφάνεια της κλίνης γέλης) για να προσδιορίσετε το Vο και να ελέγξετε τη συσκευασία στηλών. Αμέσως μετά την εφαρμογή του δείγματος, αρχίστε να συλλέγετε κλάσματα 0,5–1,5% του συνολικού όγκου της κλίνης γέλης. Ο ρυθμός ροής πρέπει να είναι

7% του όγκου της στήλης ανά ώρα. Το λοξό της λωρίδας της μπλε δεξτράνης αντιπροσωπεύει ένα σφάλμα στη στήλη, αν και κάποια ουρά είναι φυσιολογική. Η κορυφαία κορυφή υποδεικνύει τον κενό όγκο. Προσδιορίστε φασματοφωτομετρικά τον όγκο έκλουσης για την μπλε δεξτράνη (Vο για τη στήλη) στα 280 nm ή 610 nm με μέτρηση του όγκου των λυμάτων που συλλέγονται από το σημείο εφαρμογής του δείγματος μέχρι το κέντρο της κορυφής της εκροής.

Σημειώσεις: Η ανάμειξη μπλε δεξτράνης με πρότυπα κιτ ή πρωτεΐνες δείγματος δεν συνιστάται, καθώς πολλές πρωτεΐνες συνδέονται με την μπλε δεξτράνη.

Προετοιμάστε τα πρότυπα πρωτεΐνης και τη φρέσκια μπλε δεξτράνη. 3 Περιστασιακά μπορεί να εμφανιστεί κάποια συσσωματωμένη πρωτεΐνη στον κενό όγκο.

Οι ακόλουθες πρωτεΐνες μπορούν να αναμειχθούν και να τρέξουν μαζί στις στήλες:
Κυτόχρωμα c και β-αμυλάση
Καρβονική ανυδράση και αλκοολική αφυδρογονάση

Εφαρμόστε πρότυπα πρωτεϊνών στη στήλη χρησιμοποιώντας τον ίδιο όγκο δείγματος και ταχύτητα ροής όπως χρησιμοποιείται για το δείγμα μπλε δεξτράνης. Η έκλουση των τυπικών πρωτεϊνών μπορεί να ακολουθηθεί από μετρήσεις απορρόφησης στα 280 nm. Προσδιορίστε το Vμι για τα πρότυπα πρωτεϊνών με μέτρηση του όγκου των λυμάτων που συλλέγονται από το σημείο εφαρμογής του δείγματος έως το κέντρο της κορυφής των εκροών.


Γιατί ένα μέγεθος πόρων 0,22 micron θεωρείται αρκετά σφιχτό ώστε να καθιστούν τα διαλύματα που διηθούνται μέσα από αυτό αποστειρωμένα;

Δουλεύω σε βιοχημικό. εργαστήριο και χρησιμοποιούμε φίλτρα 0,22 micron για την αποστείρωση των πρωτεϊνικών διαλυμάτων, διασφαλίζοντας μικρή έως καθόλου ανάπτυξη μικροβίων κατά την αποθήκευση ή την παρατεταμένη χρήση. Γιατί είναι αυτό το πρότυπο μεγέθους; Επίσης, άκουσα ότι τα φίλτρα 0,45 μικρών παρέχουν στην πραγματικότητα περισσότερη κάθαρση από τα μικρόβια λόγω χαμηλότερων πιέσεων στο φίλτρο, που εμποδίζουν τα μικρόβια να εισέλθουν μέσω των πόρων. Υπάρχει κάποια αλήθεια σε αυτό;

Υπάρχουν πολλά επιστημονικά άρθρα που αναφέρουν ότι κανένα από τα δύο δεν παρέχει πλήρη στειρότητα στο φιλτράρισμα. Εξαρτάται μόνο από τον βαθμό στειρότητας που αναζητάτε και τους μικροοργανισμούς που υπάρχουν στα διαλύματα που πρέπει να συλληφθούν.

Και τα δύο είναι αρκετά για να φιλτράρουν τα περισσότερα μικρόβια που πιθανώς θα συναντήσετε σε εργαστήριο. .22 micron θα συλλάβει περισσότερα μόνο με βάση το μέγεθος των πόρων. Δεν νομίζω ότι υπάρχει αλήθεια στο 0,45 που παρέχει καλύτερη στειρότητα. Τα φίλτρα έχουν σχεδιαστεί για να εμποδίζουν τα μικρόβια να εισχωρήσουν μέσω πίεσης. Επιπλέον, υπάρχουν ορισμένοι οργανισμοί (όπως το μυκόπλασμα) που βρίσκονται μεταξύ της διαμέτρου 0,45-,22 micron. Λέω ότι χρησιμοποιούνται φίλτρα 0,45 micron επειδή φράζουν λιγότερο εύκολα και είναι απλώς πιο εύκολο να περάσουν αν χρησιμοποιηθούν σε σύριγγα.

Καμία μέθοδος δεν μπορεί να εγγυηθεί 100% στειρότητα. Το αυτόκαυστο είναι ένα από τα καλύτερα, αλλά δεδομένου ότι εργάζεστε με πρωτεΐνες, αυτή η μέθοδος δεν ισχύει.


Βιβλιοθήκη πόρων φιλτραρίσματος

Η διήθηση γίνεται για να επιτευχθεί ένα από τα δύο πράγματα: να διαυγαστεί και/ή να αποστειρωθεί το διήθημά σας ή για να αναλυθεί το συγκρατημένο υλικό που έχει απομείνει στη μεμβράνη. Ενώ υπάρχουν πολλές διαφορετικές εφαρμογές που εμπίπτουν σε οποιαδήποτε επιλογή, τα προϊόντα μας έχουν σχεδιαστεί για να υποστηρίζουν αποτελεσματικά ολόκληρη τη διαδικασία φιλτραρίσματος και να διασφαλίζουν ότι επιτυγχάνετε τα πιο ακριβή αποτελέσματα.

Τα προϊόντα εργαστηριακής διήθησης διατίθενται σε πολλές μορφές και με ποικίλες ιδιότητες, ωστόσο τα βασικά στοιχεία του φιλτραρίσματος και πολλές από τις ιδιότητες του φίλτρου δεν αλλάζουν. Συγκεντρώσαμε αυτούς τους πόρους για να σας βοηθήσουμε να επιλέξετε και να χρησιμοποιήσετε τα προϊόντα μας. Επικοινωνήστε με τις υπηρεσίες υποστήριξής μας ή τον τοπικό αντιπρόσωπο πωλήσεων για οποιαδήποτε περαιτέρω βοήθεια μπορεί να χρειαστείτε.


Αποστείρωση φίλτρου

Η ζήτηση για αποστειρωμένο πεπιεσμένο αέρα αυξάνεται με την υιοθέτηση προηγμένων τεχνολογιών που ήταν άγνωστες πριν από μερικά χρόνια. Η επιλογή ενός φίλτρου αποστείρωσης για ένα σύστημα πεπιεσμένου αέρα μπορεί να είναι μια δύσκολη εργασία. Η παραγωγή πρωτεϊνών, εμβολίων, αντισωμάτων, ορμονών, βιταμινών και ενζύμων περιλαμβάνει διεργασίες υψηλής τεχνολογίας που απαιτούν ασηπτικές και στείρες παροχές αερίων ή υγρών καθ' όλη τη διάρκεια του κύκλου παραγωγής. Η παραγωγή και η συσκευασία πολλών γαλακτοκομικών και τροφίμων όπως η μπύρα, το γιαούρτι, η κρέμα και το τυρί χρησιμοποιούν πεπιεσμένο αέρα ή διοξείδιο του άνθρακα. Η φύση αυτών των προϊόντων τα καθιστά επιρρεπή σε μόλυνση από μικροοργανισμούς που βρίσκονται στον πεπιεσμένο αέρα ή το αέριο.

Κάθε προϊόν που μπορεί να μολυνθεί από αερομεταφερόμενα βακτήρια πρέπει να προστατεύεται. Στην περίπτωση τροφίμων και χημικών ουσιών που παράγονται με ζύμωση, τα βακτήρια θα προκαλούσαν σοβαρά ελαττώματα και την απόρριψη του προϊόντος.

Στη ζύμωση και τη φαρμακευτική βιομηχανία, ο πεπιεσμένος αέρας και άλλα αέρια χρησιμοποιούνται σε κάθε στάδιο της παραγωγικής διαδικασίας, από τον καθαρισμό της πρώτης ύλης μέχρι την κατασκευή και τη συσκευασία. Ο πεπιεσμένος αέρας μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως πηγή ενέργειας σε μια διαδικασία ή ως βιοϊατρικό βοήθημα. Οι κινητήρες αέρα χρησιμοποιούνται για ανάμειξη σκόνης χωρίς εκρήξεις, οργάνων και κυλίνδρων για την παρτίδα υλικών.

Ο αέρας διεργασίας μπορεί να χρησιμοποιηθεί για αερισμό υγρών, ζύμωση σπόρων και εργαστηριακές εφαρμογές. Η ανάμειξη αέρα στα προπαρασκευαστικά χημικά ή στο τελικό προϊόν σημαίνει ότι πρέπει να είναι τόσο καθαρά και αποστειρωμένα όσο το υλικό που εξυπηρετεί, ώστε να μην υπάρχει κίνδυνος ρύπανσης από στερεά, υγρά ή μικροοργανισμούς.

Οι μικροοργανισμοί είναι εξαιρετικά μικροί και περιλαμβάνουν βακτήρια, ιούς, ζυμομύκητες, σπόρια μυκήτων και βακτηριοφάγους. Τα βακτήρια μπορεί να είναι από 0,2 micron έως 4 micron, οι ιοί λιγότερο από 0,3 micron και οι βακτηριοφάγοι έως και 0,04 micron. Τα φίλτρα που πρέπει να αντιμετωπίσουν αυτούς τους οργανισμούς πρέπει να έχουν απόδοση μάλλον καλύτερη από αυτές τις διαστάσεις. Η παρουσία αυτών των ζωντανών οργανισμών μπορεί να είναι ένα σοβαρό πρόβλημα στις βιομηχανίες επεξεργασίας, επειδή είναι σε θέση να πολλαπλασιάζονται στις σωστές συνθήκες.

Κατά την επιλογή φίλτρων αποστείρωσης πεπιεσμένου αέρα, πρέπει να πληρούνται οι ακόλουθες προϋποθέσεις:

Το φίλτρο δεν πρέπει να επιτρέπει τη διείσδυση οποιουδήποτε τύπου μικροοργανισμού που θα μπορούσε να προκαλέσει μόλυνση.

Πρέπει να μπορεί να λειτουργεί αξιόπιστα για μεγάλες περιόδους.

Τα υλικά κατασκευής πρέπει να είναι αδρανή ώστε να μην υποστηρίζουν τη βιολογική ανάπτυξη.

Πρέπει να είναι εύκολο στην εγκατάσταση και τη συντήρηση.

Πρέπει να είναι σε θέση να ελεγχθεί για ακεραιότητα.

Πρέπει να μπορεί να αποστειρώνεται επανειλημμένα με ατμό.

Το φίλτρο πρέπει να είναι όσο το δυνατόν μικρότερο σύμφωνα με την απόδοση, ώστε να μειώνονται τα προβλήματα εγκατάστασης.

Τα σύγχρονα φίλτρα αποστείρωσης αέρα χρησιμοποιούν πτυχωτές υδρόφοβες βοριοπυριτικές μικροΐνες χωρίς συνδετικό υλικό, οι οποίες έχουν απόδοση καλύτερη από 99,9999% στα 0,01 micron και παραμένουν σε λειτουργία για έως και 12 μήνες. Το στοιχείο έχει κατασκευαστεί χρησιμοποιώντας μια συγχώνευση μέσων φίλτρου (Εικόνα 1) η μέση διάμετρος της ίνας είναι περίπου 0,5 micron. Ο μολυσμένος αέρας χτυπά το εξωτερικό στρώμα ενός σχετικά χονδροειδούς μέσου (2 micron). Αυτό παγιδεύει τα σωματίδια βρωμιάς πριν φτάσουν στις μικροΐνες. Το βοριοπυριτικό συλλέγει τα σωματίδια μέχρι 0,01 micron. Οποιαδήποτε αερολύματα υπάρχουν εδώ μετατρέπονται σε υγρό. Κατά την απομάκρυνση μικροοργανισμών, υπάρχουν τρεις κύριοι μηχανισμοί - η άμεση αναχαίτιση, η αδρανειακή πρόσκρουση και η κίνηση Brown. Το δεύτερο στρώμα μέσου 2 micron έχει σχεδιαστεί για να συγκρατεί τις μικροΐνες στη θέση τους. Αυτά τα δύο μέσα σε συνδυασμό συγκρατούν τα στερεά σωματίδια. Σε ένα ρεύμα ξηρού αέρα θα συγκρατήσουν τα βακτήρια. Εφόσον τα βακτήρια δεν έχουν μέσα πολλαπλασιασμού στο μέσο, ​​μπορούν να συγκρατηθούν. Ένα μέσο διήθησης που περιέχει ένα συνδετικό υλικό που θα μπορούσε να λειτουργήσει ως θρεπτικό θα ήταν ακατάλληλο. Η πλήρης κατασκευή φαίνεται στο Σχήμα 2.

ΦΙΓΟΥΡΑ 1 . Μέσα μικροϊνών χωρίς συνδετικό υλικό. (υπερφίλτρο)

ΣΧΗΜΑ 2 . Κατασκευή στοιχείου βοριοπυριτικού φίλτρου. (Ζάντερ)

Τα φίλτρα φυσιγγίων μεμβράνης είναι εξαιρετικά εύκαμπτα και υψηλής αντοχής σε εφελκυσμό. Η κατασκευή φυσιγγίων που βασίζεται σε συνδυασμό πολυστρωματικών μέσων φίλτρου υποστηρίζει ένα πλέγμα άρδευσης. Τα πολυμερή νάιλον και πολυπροπυλενίου που είχαν χρησιμοποιηθεί προηγουμένως σε χονδρότερες ποιότητες χρησιμοποιούνται τώρα ως φίλτρα μεμβράνης. Στρώματα νάιλον μικροπορώδους μεμβράνης και προφίλτρου πολυπροπυλενίου πτυχώνονται μαζί και υποστηρίζονται από έναν εσωτερικό πυρήνα. Τα ακραία καλύμματα σφραγίζονται σε τήγμα σε πολυπροπυλένιο. Η μεμβράνη είναι από λεπτό νάιλον με ελεγχόμενο μέγεθος πόρων. Η κατασκευή του διασφαλίζει ότι δεν μπορεί να απελευθερώσει ίνες προς τα κάτω και μπορεί να τεθεί σε αυτόκαυστο επανειλημμένα.

Φίλτρο κοίλων ινών

Οι κοίλες ίνες αναπτύχθηκαν αρχικά για αιμοκάθαρση και τώρα έχουν προσαρμοστεί για πεπιεσμένο αέρα. Το φίλτρο είναι διατεταγμένο με μικρότερο άνοιγμα μεγεθών οπών, αλλά με μεγαλύτερο αριθμό μεμβρανών. Αυτό δίνει μεγαλύτερη ικανότητα συγκράτησης. Λόγω της στενότερης κατανομής των πόρων από τα συμβατικά φίλτρα μεμβράνης, ο αριθμός των πόρων ανά μονάδα επιφάνειας φίλτρου είναι μεγαλύτερος, γεγονός που παρατείνει τη διάρκεια ζωής. Μια πιο στενή κατανομή πόρων σημαίνει ότι το μεγαλύτερο μέγεθος πόρων μειώνεται πολύ. Ένα συμβατικό φίλτρο μεμβράνης έχει μέγεθος πόρων τουλάχιστον 0,3 micron μεγαλύτερο από ένα φίλτρο κοίλων ινών.

Η ανάπτυξη ενός στοιχείου φίλτρου μεμβράνης με ονομαστικό μέγεθος πόρων 0,1 micron και μειωμένη κατανομή πόρων σημαίνει τη διαφορά μεταξύ της κατακράτησης ιών και βακτηρίων. Η κατασκευή του φίλτρου κοίλων ινών σημαίνει ότι είναι οικονομική η κατασκευή μικρότερων στοιχείων για εργαστηριακή χρήση.

Κατοικίες

Τα αποστειρωμένα φυσίγγια φίλτρου πρέπει να τοποθετούνται σε ένα περίβλημα συγκράτησης πίεσης. Η μέθοδος σφράγισης είναι με μονές ή διπλές στεγανοποιήσεις δακτυλίου Ο που επιτρέπουν σφράγιση και κίνηση κατά την αποστείρωση με ατμό ή την φόρτιση με κραδασμούς χωρίς να σπάσει η τσιμούχα. Τα περιβλήματα του φίλτρου αποστείρωσης πεπιεσμένου αέρα πρέπει να σχεδιαστούν για να προστατεύουν το φυσίγγιο του φίλτρου από την καταπόνηση. Τα περιβλήματα από ανοξείδωτο χάλυβα είναι η συνήθης επιλογή υλικού που πρέπει να γυαλίζονται ηλεκτρολυτικά μέσα και έξω και δεν έχουν αυλακώσεις ή γωνίες στις οποίες μπορούν να συγκεντρωθούν μικροοργανισμοί. Θα πρέπει να ενσωματώνουν αυτόματη αποστράγγιση συμπυκνωμάτων. Για οικονομία, τα αποστειρωμένα φίλτρα μπορούν να κατασκευαστούν από περιβλήματα γαλβανισμένου χάλυβα με μέρη από ανοξείδωτο χάλυβα σε επαφή με τον πεπιεσμένο αέρα ή με επίστρωση ανθεκτική στη διάβρωση. Διατίθενται επίσης περιβλήματα αλουμινίου με προστασία με βαφή πούδρας.

Επιλογή φίλτρου

Τα φίλτρα έχουν το μέγεθος σύμφωνα με τις πληροφορίες παροχής έναντι πτώσης πίεσης που παρέχονται από τον κατασκευαστή. Ένα αποστειρωμένο φίλτρο έχει αρχική πτώση πίεσης περίπου 0,1 bar, αν και η βαθμολογία μπορεί να μειωθεί εάν είναι απαραίτητο για να ικανοποιηθούν οι απαιτήσεις της διαδικασίας, μια πτώση πίεσης περίπου 0,2 bar είναι ενδεικτική της συλλογής βρωμιάς στο φίλτρο και πρέπει να αντικατασταθεί. Ένα προ-φίλτρο θα πρέπει κανονικά να ενσωματωθεί στο κύκλωμα για να μειωθεί το φορτίο στο αποστειρωμένο φίλτρο. Τα προφίλτρα τύπου συγχώνευσης μπορούν να διατηρήσουν μια υψηλή πτώση πίεσης, αλλά είναι φυσιολογικό να αντικαταστήσετε το στοιχείο μεταξύ 0,3 και 0,6 bar.

Ένα πλήρες συγκρότημα φίλτρου για την παραγωγή αποστειρωμένου αέρα θα περιέχει έναν αριθμό ξεχωριστών στοιχείων. Εάν η αποστειρωμένη παροχή πρόκειται να ληφθεί από ένα μεγαλύτερο σύστημα με ποικιλία εφαρμογών, ένας συμπιεστής με λίπανση μπορεί να είναι η πηγή αέρα σε αυτήν την περίπτωση θα χρειαστεί να ενσωματωθεί ένα φίλτρο ενεργού άνθρακα. Εάν όλος ο αέρας στη διαδικασία πρέπει να είναι αποστειρωμένος, τότε ένας συμπιεστής χωρίς λάδι είναι ίσως η καλύτερη επιλογή. Τα σχήματα 3 και 4 δείχνουν μερικές από τις πιθανές επιλογές.


Αιτίες μόλυνσης από μυκόπλασμα

Τα μυκοπλάσματα εισέρχονται στην κυτταρική καλλιέργεια μέσω διαφόρων πηγών που είναι δύσκολο να εντοπιστούν. Αυτά περιλαμβάνουν το εργαστηριακό προσωπικό, τον ορό, τα μέσα κυτταροκαλλιέργειας, τα λουτρά νερού, τους επωαστήρες κ.λπ. Η μόλυνση από τον άνθρωπο αποτελεί τη μεγαλύτερη πηγή μεταξύ αυτών που αναφέρθηκαν παραπάνω. Οι μολυντές μπορούν να εξαπλωθούν μέσω βρώμικων ενδυμάτων, εργαστηριακών ρούχων, ανθρώπινης ομιλίας κοντά στη στρωτή ροή αέρα, ανθρώπινου τριχωτού της κεφαλής, φτερνίσματος, βήχα κ.λπ. Επίσης, η συνεχής εισροή ατόμων οπουδήποτε φυλάσσονται οι κυτταροκαλλιέργειες θα αυξήσει τον κίνδυνο μόλυνσης.

Τα μυκόπλασμα μπορούν να εξαπλωθούν από αυτές τις πηγές μέσω διασταυρούμενης μόλυνσης και λόγω κακών εργαστηριακών τεχνικών. Αυτά περιλαμβάνουν την επαναχρησιμοποίηση πιπετών για πολλαπλές κυτταρικές σειρές αντί για τη χρήση μιας χρήσης ή την επαναχρησιμοποίηση γαντιών. Ο ορός είναι επίσης πηγή μόλυνσης από μυκόπλασμα. Λόγω του θολού χαρακτήρα του, η μόλυνση είναι δύσκολο να ανιχνευθεί στον ορό που χρησιμοποιείται πιο συχνά για κάθε κυτταρική καλλιέργεια. Η επαναχρησιμοποίηση του ίδιου μπουκαλιού ορού ξανά και ξανά για κάθε υποκαλλιέργεια μπορεί να ενισχύσει την ανάπτυξη των μυκοπλασμάτων. Ο ορός είναι πλούσιος σε θρεπτικά συστατικά και επίσης η καλύτερη πηγή για τον πολλαπλασιασμό του μυκοπλάσματος. Επιπλέον, προστίθεται στα μέσα μετά την αποστείρωση σε αυτόκλειστο, επομένως, δεν υπάρχει καμία διασφάλιση ότι ο ορός είναι απαλλαγμένος από μόλυνση.

Τα αερολύματα που παράγονται (κατά την ομιλία ή το σιφώνιο) κατά την εργασία στη στρωτή ροή αέρα είναι επίσης από τις κύριες αιτίες μόλυνσης. Αυτά τα αερολύματα που δημιουργούνται θα εισέλθουν στο μέσο καλλιέργειας κατά τις διαδικασίες υποκαλλιέργειας ή από τον αέρα εάν η κυτταρική σειρά παραμείνει εκτεθειμένη για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα. Τα αερολύματα είναι αόρατα με γυμνά μάτια και ως εκ τούτου δεν μπορούν να ανιχνευθούν μέχρι να οδηγήσει σε μόλυνση.

Μια άλλη πηγή του προβλήματος είναι τα μέσα που χρησιμοποιούνται για την υποκαλλιέργεια, τα οποία είναι διαθέσιμα τόσο σε υγρή όσο και σε μορφή σκόνης. Λόγω ακατάλληλου χειρισμού ή κακών εργαστηριακών τεχνικών, το μυκόπλασμα μπορεί να εξαπλωθεί μέσω αυτής της μορφής κονιοποιημένων μέσων. Η διήθηση δεν διασφαλίζει την πλήρη αποστείρωση καθώς το μυκόπλασμα μπορεί να διαφύγει ακόμη και από φίλτρα 0,2 micron.

Εικόνα 1: Μόλυνση! Τα μέσα ιστοκαλλιέργειας έχουν συχνά δείκτες που περιλαμβάνονται στα μέσα που κιτρινίζουν από χαμηλό pH λόγω μικροβιακής μόλυνσης. Φωτογραφία από τον Kaustubh Kishor Jadhav.

Τα μυκόπλασμα μπορούν να παραμείνουν σε ξηρή κατάσταση για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα. Όταν έρχονται σε επαφή με μια πηγή θρεπτικών συστατικών, αρχίζουν να πολλαπλασιάζονται σύντομα. Από τη στιγμή που υπάρχουν στο εργαστηριακό περιβάλλον, είναι δύσκολο να εξαλειφθούν. Μπορείτε να καταστείλετε την ανάπτυξη του μυκοπλάσματος αλλά δεν μπορείτε να το εξαλείψετε εντελώς. Όταν εμφανίζονται μυκόπλασμα στην καλλιέργεια, είναι μια καλή επιλογή να απορρίπτονται οι φιάλες (εκτός εάν η πηγή της καλλιέργειας είναι αναντικατάστατη ή πολύ ακριβή).


Μηχανικές Προοπτικές στη Βιοτεχνολογία

2.46.4.8 Αντίδραση και διήθηση μεμβράνης

Ο συνδυασμός ενός βιοαντιδραστήρα με ένα σύστημα φιλτραρίσματος μεμβράνης μπορεί να εξυπηρετήσει διαφορετικούς σκοπούς είτε μαζικής ανακύκλωσης στον βιοαντιδραστήρα είτε ανάκτησης προϊόντος από τον βιοαντιδραστήρα. 3 Διατίθεται μεγάλη γκάμα μεμβρανών μικροδιήθησης για την ανακύκλωση βιολογικών κυττάρων και μεμβρανών υπερδιήθησης για την ανακύκλωση ενώσεων μεγάλου μοριακού βάρους, όπως ένζυμα ή μεγάλα συνένζυμα. Οι μεμβράνες μπορούν να έχουν μια συμμετρική ή ασύμμετρη δομή και μπορούν επομένως να έχουν μια διπλή λειτουργία ακινητοποίησης του βιοκαταλύτη και διαχωρισμού προϊόντος ή καθαρά μια λειτουργία ανάκτησης προϊόντος. Στην πρώτη περίπτωση, όπου η μεμβράνη χρησιμεύει ως υποστήριξη βιοκαταλύτη και μονάδα διαχωρισμού, ο βιοκαταλύτης μπορεί να ακινητοποιηθεί εντός της πορώδους μεμβράνης ή στην επιφάνεια της μεμβράνης με διαφορετικές μεθόδους όπως ομοιοπολική σύνδεση, ιοντικές αλληλεπιδράσεις, προσρόφηση, παγίδευση, σχηματισμός γέλης ή διασταύρωση -σύνδεση. Μια ποικιλία διαφορετικών γεωμετριών, όπως επίπεδες, σπειροειδείς και σωληνοειδείς δομές είναι διαθέσιμες για τις μεμβράνες, οι οποίες μπορούν στη συνέχεια να συναρμολογηθούν στις κατάλληλες μονάδες μεμβράνης και μονάδες για τυποποιημένους συνδέσμους στις γραμμές τροφοδοσίας, συγκράτησης και διείσδυσης.

Η έννοια του EMR αναπτύχθηκε και εφαρμόστηκε με επιτυχία από τους Kula και Wandrey 37 και άλλους. Η κλασική εργασία για την ενζυματική αναγωγική αμίνωση α-κετοϊσοκαπροϊκού σε 1-λευκίνη με αφυδρογονάση L-λευκίνης και ταυτόχρονη αναγέννηση συμπαράγοντα με μυρμηκική αφυδρογονάση σε αντιδραστήρα μεμβρανικής μεμβράνης που λειτουργεί συνεχώς 38 έχει πρωτοπορήσει σε αυτόν τον τρόπο ενσωμάτωσης για μεγάλο αριθμό βιομηχανικών βιοδιαδικασιών. Η ενζυματική παραγωγή αμινοξέων σε αντιδραστήρες μεμβράνης με ταυτόχρονη αναγέννηση ανηγμένου δινουκλεοτιδίου β-νικοτιναμιδίου αδενίνης (NADH) έχει αναπτυχθεί σε βιομηχανική κλίμακα 39 στο Evonik στη Γερμανία. Το EMR έχει εφαρμοστεί με επιτυχία σε πολλές παραγωγές ρουτίνας από άλλες βιομηχανίες (π.χ. Tanabe Seiyaku, Sepracor και Sigma-Aldrich), αποδεικνύοντας τη βιομηχανική σημασία αυτής της ολοκλήρωσης αντίδρασης και διήθησης μεμβράνης. 1 Οι αντιδραστήρες μεμβράνης έχουν το πλεονέκτημα της χρήσης διαλυτών συστατικών (ένζυμα, υποστρώματα και προϊόντα), τα οποία μπορούν εύκολα να αναπληρωθούν, για παράδειγμα, για παροχή υποστρώματος ή εάν χρειάζεται περισσότερο ένζυμο για να διατηρηθεί σταθερός ο ρυθμός βιομετατροπής λόγω των επιδράσεων απενεργοποίησης ενζύμων. Επομένως, πρέπει να δοθεί προσοχή στην παρασκευή του ενζύμου έτσι ώστε η λειτουργική σταθερότητα του ελεύθερου ενζύμου να είναι αρκετά καλή για τη χρήση του στο EMR.

Οι επεκτάσεις της κλασικής ιδέας EMR περιλαμβάνουν τον αντιδραστήρα ενζύμου φορτισμένης μεμβράνης υπερδιήθησης, όπου χρησιμοποιούνται αρνητικά φορτισμένες μεμβράνες υπερδιήθησης για να συγκρατήσουν τον φυσικό συμπαράγοντα στον αντιδραστήρα ή τη χρήση μεμβρανών νανοδιήθησης. Για τη βιομετατροπή ελάχιστα διαλυτών υποστρωμάτων, μπορεί να χρησιμοποιηθεί ένας αντιδραστήρας μεμβράνης γαλακτώματος που αποτελείται από ξεχωριστό θάλαμο με υδρόφιλη μεμβράνη υπερδιήθησης για γαλακτωματοποίηση, βρόχο EMR με κανονική μονάδα υπερδιήθησης και αντλία κυκλοφορίας. 1

Άλλα παραδείγματα περιλαμβάνουν εναντιομερώς καθαρά ενδιάμεσα, αντικαρκινικά φάρμακα, βιταμίνες, αντιφλεγμονώδεις ενώσεις, κυκλοδεξτρίνες και αντιβιοτικά. 40


Δες το βίντεο: Recenze proteinu EXTRIFIT (Οκτώβριος 2022).