Πληροφορίες

Ταυτοποίηση πρωτόζωων στο μικροσκόπιο

Ταυτοποίηση πρωτόζωων στο μικροσκόπιο


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Παρατήρησα ίσως Πρωτόζωα από στάσιμο ΦΡΕΣΚΟ νερό και από αργά ρέον ΓΛΕΣΚΟ νερό. Είμαι εντελώς ντιλέταντος. Μπορείτε να πείτε ποια είναι αυτά τα πλάσματα;

https://www.youtube.com/watch?v=6D5ck3zNJzA&t=474s

Σας ευχαριστώ.

Προστέθηκε εικόνα για να γίνουμε πιο συγκεκριμένοι


Με την πρώτη ματιά, οι οργανισμοί μπορεί να έχουν την εμφάνιση πρωτόζωων σαν βλεφαρίδες. Ωστόσο, πιστεύω ότι αυτοί οι «εντελώς σωληνοειδείς» μικροοργανισμοί είναι στην πραγματικότητα διάτομα.

Τα διάτομα είναι ένα ευρύ φάσμα ευκαρυωτικών μικροφυκών που αποτελούν ένα μεγάλο ποσοστό της ομάδας φυτοπλαγκτού. (Γη διατόμων είναι τα υπολείμματα των ασβεστολιθικών τοιχωμάτων τους)

Είναι πιθανότατα διάτομα λόγω της φαινομενικής σκληρής μεμβράνης τους και της ελαφράς καφέ-πράσινης χρωστικής τους, χαρακτηριστική των διατόμων ετεροκόντ.

Δεν θα μπορούσα να προσδιορίσω τον οργανισμό σε επίπεδο οικογένειας. Ωστόσο, μπορεί να θέλετε να ολοκληρώσετε την έρευνά σας κοιτάζοντας κάτω από τη σειρά "Pennales".

Για γενικές πληροφορίες σχετικά με τα Διάτομα, μπορείτε να επισκεφθείτε τη διεύθυνση https://en.wikipedia.org/wiki/Μορφολογία και περιγραφή του διατόμου που είναι διαθέσιμη στη διεύθυνση: https://books.google.co.uk/books?id=xhLJvNa3hw0C&printsec=frontcover&source=gbs_ge_summary_r&cad =0#v=onepage&q&f=false

Καλή τύχη


Εργαστήριο 3: Πρωτόζωα

Οι οργανισμοί που αναφέρονται ως πρωτόζωα (&ldquofirst ζώα&rdquo) αποτελούν μια διαφορετική ομάδα ευκαρυωτικών (κυρίως) μονοκύτταρων οργανισμών. Στα πρωτόζωα όλες οι λειτουργίες της ζωής εκτελούνται εντός των ορίων ενός μόνο κυττάρου. Αν και προφανώς δεν υπάρχουν όργανα ή ιστοί στα πρωτόζωα, απέχουν πολύ από τους «απλούς» οργανισμούς όπως περιγράφονται μερικές φορές. Στην πραγματικότητα, τα κύτταρα ορισμένων ειδών παρουσιάζουν τη μεγαλύτερη πολυπλοκότητα και εσωτερική οργάνωση από κάθε οργανισμό στη Γη!

Τα γενικά χαρακτηριστικά των πρωτοζώων περιλαμβάνουν: μικρό μέγεθος, μονοκύτταρα (αλλά ορισμένα είδη είναι αποικιακά ή έχουν πολυκύτταρα στάδια), σώμα γυμνό ή καλυμμένο από εξωσκελετό (δοκιμή) που σχηματίζεται από πυρίτιο ή ανθρακικό ασβέστιο. Με περισσότερα από 64.000 ζωντανά είδη, τα πρωτόζωα παρουσιάζουν μια φανταστική ποικιλία μορφών. Παρόλο που βρίσκονται οπουδήποτε υπάρχει ζωή, τα πρωτόζωα απαιτούν πάντα υγρασία, η οποία τα περιορίζει σε ένα στενό φάσμα περιβαλλοντικών συνθηκών στο γλυκό νερό ή στους θαλάσσιους οικοτόπους, στο έδαφος, στην οργανική ύλη σε αποσύνθεση ή στο σώμα των φυτών και των ζώων. Πολλές μορφές είναι οικολογικά σημαντικές, σχηματίζοντας ουσιαστικούς κρίκους στις τροφικές αλυσίδες και στα συστήματα αποσύνθεσης.

Περίπου 10.000 είδη έχουν στενές (συμβιωτικές) σχέσεις με ζώα ή φυτά. Αυτές οι σχέσεις μπορεί να είναι αμοιβαίες (ωφελούνται και οι δύο σύντροφοι), συμμεριστικές (ο ένας ωφελείται, ενώ ο άλλος ούτε βοηθά ούτε βλάπτεται) ή παρασιτικές (το παράσιτο ωφελεί τον ξενιστή βλάπτεται). Μάλιστα, μερικές από τις σημαντικότερες ασθένειες του ανθρώπου και των κατοικίδιων ζώων προκαλούνται από παρασιτικά πρωτόζωα!

Παρόλο που τα πρωτόζωα συγκεντρώνονταν σε τέσσερις ομάδες με βάση τον τύπο της κίνησής τους (δηλαδή, εάν προωθούνται από μαστίγια, βλεφαρίδες, ψευδοπόδια ή από εκείνες τις μορφές που δεν διαθέτουν κινητικά οργανίδια), στοιχεία από μια ανάλυση των γονιδίων που κωδικοποιούν τη μικρή υπομονάδα του ριβοσωμικού RNA καθώς και για αρκετές πρωτεΐνες έχει αλλάξει σημαντικά (και συνεχίζει να αλλάζει) τις έννοιές μας για τις φυλογενετικές συγγένειες και σχέσεις όχι μόνο των ομάδων πρωτοζώων αλλά όλων των ευκαρυωτών και έχει αναγκάσει μια αναθεώρηση της ταξινόμησης των πρωτοζώων. Αυτό που ακολουθεί, λοιπόν, είναι μια εισαγωγή σε μερικά από τα επί του παρόντος αναγνωρισμένα πρωτόζωα φύλα καθώς και σε μερικά από τα πιο σημαντικά κλάδια και άτυπες ομάδες αυτών των οργανισμών.

Όλα τα μέλη αυτής της φυλής κινούνται με μαστίγια, προεξοχές που μοιάζουν με μαστίγιο που αποτελούνται από μικροσωληνίσκους καλυμμένους σε μια προέκταση της πλασματικής μεμβράνης. Αν και ορισμένα μέλη αυτού του φύλου όπως η Euglena είναι αυτότροφα, ορισμένα ετερότροφα είδη προκαλούν σοβαρές ασθένειες σε ανθρώπους και κατοικίδια ζώα. Για παράδειγμα, Trypanosoma brucei προκαλεί αφρικανική ασθένεια του ύπνου στους ανθρώπους και μια σχετική ασθένεια στα κατοικίδια ζώα. Αυτή η ασθένεια, η οποία μεταδίδεται από το δάγκωμα μιας μύγας τσετσε (Glossina spp.), προκαλεί θάνατο σε περίπου τα μισά από τα μολυσμένα άτομα και μόνιμη εγκεφαλική βλάβη σε πολλά από αυτά που επιβιώνουν.

Ένα άλλο επικίνδυνο ευγενόζωο παράσιτο είναι Trypanosoma cruzi που προκαλεί τη νόσο Chagas&rsquo, η οποία επηρεάζει περίπου δύο έως τρία εκατομμύρια ανθρώπους στην Κεντρική και Νότια Αμερική, 45.000 από τους οποίους πεθαίνουν κάθε χρόνο. Τέλος, αρκετά είδη Leishmania που μεταδίδονται από τα τσιμπήματα της αμμομύγας προκαλούν σοβαρές ασθένειες στον άνθρωπο που μπορεί να επηρεάσουν το ήπαρ ή τη σπλήνα ή να προκαλέσουν παραμορφωτικές βλάβες των βλεννογόνων της μύτης και του λαιμού και δερματικά έλκη.

Αυτή η μεγάλη και ποικιλόμορφη ομάδα περιλαμβάνει μερικά από τα πιο πολύπλοκα πρωτόζωα που είναι γνωστά όπως π.χ Παραμήκιο, Στέντωρ, Spirostomum και Vorticella. Η κίνηση γίνεται πάντα με βλεφαρίδες και όλες οι μορφές είναι πολυπύρηνες, έχοντας τουλάχιστον έναν μακροπυρήνα (υπεύθυνο για τις μεταβολικές και αναπτυξιακές λειτουργίες του κυττάρου) και έναν ή περισσότερους μικροπυρήνες που εμπλέκονται στη σεξουαλική αναπαραγωγή. Οι περισσότερες είναι ολοζωικές, αλλά μερικές μορφές είναι παρασιτικές και προκαλούν βλάβες στους ξενιστές τους, συμπεριλαμβανομένων των ανθρώπων. Αρκετά παρασιτικά είδη μπορεί να προκαλέσουν σοβαρά προβλήματα στα ψάρια ενυδρείων και στα ψάρια σε περιβλήματα φάρμας.

Εκτός από έναν αριθμό πολύπλοκων οργανιδίων, πολλά βλεφαροειδή έχουν ένα γλυπτό, άκαμπτο εξωτερικό κάλυμμα που ονομάζεται μεμβράνη. Ενσωματωμένα στο πολτό είναι οι βλεφαρίδες συν μια σειρά από δομές που μοιάζουν με νήματα που ονομάζονται τριχοκύστεις. Με μηχανική ή χημική διέγερση, αυτές οι τριχοκύστεις μπορούν να αποφορτιστούν για να παράγουν μακριά, κολλώδη πρωτεϊνικά νήματα που παραμένουν προσκολλημένα στον οργανισμό. Αν και η λειτουργία αυτών των δομών είναι πιθανώς αμυντική, ήταν δύσκολο να αποδειχθεί αυτό.

Σε αυτή την ομάδα περιλαμβάνονται πολλά είδη που αποτελούν ένα μεγάλο συστατικό του θαλάσσιου φυτοπλαγκτού, καθιστώντας τα μερικούς από τους σημαντικότερους παραγωγούς σε θαλάσσια περιβάλλοντα. Οι τοξίνες που παράγονται από την υπερβολική αφθονία (άνθιση) ορισμένων από αυτά τα θαλάσσια είδη μπορεί να οδηγήσουν στις λεγόμενες κόκκινες παλίρροιες που δηλητηριάζουν τα ψάρια ή φιλοξενούνται στα οστρακοειδή, καθιστώντας τα δηλητηριώδη για κατανάλωση! Άλλα όπως το Noctiluca παράγουν φως (βιοφωταύγεια). Άλλα σημαντικά δινομαστιγώματα είναι οι zooxanthellae που είναι αμοιβαία στα στοματικά που δημιουργούν ύφαλους και στα γιγάντια μύδια. Χωρίς τη φωτοσυνθετική τους δραστηριότητα, οι κοραλλιογενείς ύφαλοι (και όλα όσα εξαρτώνται από αυτούς) θα έπαυαν να υπάρχουν!

Αυτή η ομάδα περιέχει ενδοπαρασιτικά πρωτόζωα, τα οποία διαθέτουν όλα (τουλάχιστον σε ορισμένα αναπτυξιακά στάδια) έναν εξειδικευμένο συνδυασμό οργανιδίων που ονομάζεται κορυφαίο σύμπλεγμα, το οποίο περιέχει δομές που βοηθούν στη διείσδυση στον ξενιστή. Παρόλο που υπάρχει ένας αριθμός μελισσόμπλοκων που προκαλούν ασθένειες στον άνθρωπο και στα ζώα τους, το πιο σοβαρό από αυτά είναι η ελονοσία, η οποία προκαλείται στον άνθρωπο από τέσσερα είδη Πλασμώδιο που μεταδίδονται από το τσίμπημα του θηλυκού κουνουπιού Ανοφέλη. Υπάρχουν πάνω από 600 εκατομμύρια άνθρωποι στον κόσμο με τη νόσο και κάθε χρόνο περίπου 2 εκατομμύρια άνθρωποι (κυρίως παιδιά) πεθαίνουν από τις επιπτώσεις της άμεσα και πολλοί άλλοι πεθαίνουν έμμεσα.

Οι παραβασαλίδες αποτελούν μια άλλη κατηγορία μαστιγωτών πρωτόζωων που δεν έχουν μιτοχόνδρια. Αν και ορισμένα παραβασαλίδια όπως Τριχωνύμφα ζουν ως αμοιβαίοι στα έντερα των τερμιτών και των κατσαρίδων όπου (με τη βοήθεια βακτηριακών ενδοσυμβίων) παράγουν ένζυμα που διασπούν το ξύλο (κυτταρίνη) στη διατροφή του ξενιστή τους, ενώ άλλα είναι ανθρώπινα παθογόνα.

Trichomonas vaginalis είναι ένα σεξουαλικά μεταδιδόμενο παραβασαλίδιο πρωτόζωο που προκαλεί λοιμώξεις του ουρογεννητικού συστήματος. Η μόλυνση από T. vaginalis είναι ένα από τα πιο κοινά και ιάσιμα σεξουαλικά μεταδιδόμενα νοσήματα με πέντε εκατομμύρια νέες λοιμώξεις που αναφέρονται κάθε χρόνο μόνο στις Ηνωμένες Πολιτείες και πάνω από 200 εκατομμύρια παγκοσμίως! Το παράσιτο αναπαράγεται ασεξουαλικά μέσω της διαμήκους σχάσης, αλλά σε αντίθεση με πολλά άλλα πρωτόζωα, ο οργανισμός δεν έχει στάδιο κύστης ως μέρος της αναπαραγωγής.

Αυτή η ομάδα περιέχει αμοιβάδες και άλλα πρωτόζωα που κινούνται χρησιμοποιώντας τις κινητές προεκτάσεις του κυτταροπλάσματος που ονομάζονται ψευδοπόδια. Αυτά τα ψευδοπόδια υπάρχουν σε διάφορα μεγέθη και σχήματα, τα πιο κοινά από τα οποία είναι μάλλον μεγάλα και αμβλύ. Μερικά είδη έχουν λεπτά, βελονοειδή ψευδοπόδια, ενώ άλλα έχουν αυτά που σχηματίζουν ένα πλέγμα που μοιάζει με δίχτυ γύρω από τον οργανισμό. Η διατροφή στις περισσότερες μορφές είναι ολοζωική με την κατάποση του θηράματος (φαγοκυττάρωση).

Οι Amebas είναι γυμνά πρωτόζωα που βρίσκονται συχνά σε ρηχά, καθαρά νερά. Παρόλο που οι περισσότερες αμείδες ζουν ελεύθερα, τρέφονται με μικρούς οργανισμούς με τα ψευδοπόδια τους, ορισμένες μορφές είναι παρασιτικές και μπορούν να προκαλέσουν προβλήματα στον άνθρωπο. Για παράδειγμα, το Entamoeba histolytica είναι ένα σημαντικό εντερικό παράσιτο των ανθρώπων που ζουν σε μέρη του κόσμου με κακές εγκαταστάσεις υγιεινής. Το παράσιτο (το οποίο προκαλεί αμιμική δυσεντερία), προσβάλλεται από το πόσιμο νερό μολυσμένο με ανθρώπινα απόβλητα ή από την κατανάλωση ωμά λαχανικά πλυμένα με τέτοιο νερό. Υπό τις κατάλληλες συνθήκες, το στάδιο σίτισης μπορεί να αναπαραχθεί εκρηκτικά, να διαβρώσει το εντερικό τοίχωμα και να δημιουργήσει έλκη. Εκτός από την πρόκληση διάρροιας, το E. histolytica μπορεί να δημιουργήσει προβλήματα εκτός του πεπτικού σωλήνα εισβάλλοντας στην κυκλοφορία του αίματος. Μόλις εισέλθει στην κυκλοφορία του αίματος μπορεί να μεταναστεύσει στον εγκέφαλο, το συκώτι και τους πνεύμονες και συχνά με πολύ σοβαρά αποτελέσματα.

Η μούχλα λάσπης είναι ένας ευρύς όρος που περιγράφει οργανισμούς που μοιάζουν με μύκητες που χρησιμοποιούν σπόρια για να αναπαραχθούν. Αν και τα καλούπια λάσπης ταξινομούνταν παλαιότερα ως μύκητες, δεν θεωρούνται πλέον μέρος αυτού του βασιλείου. Η κοινή τους ονομασία αναφέρεται σε μέρος των κύκλων ζωής ορισμένων από αυτούς τους οργανισμούς όπου μπορούν να εμφανιστούν ως ζελατινώδης &ldquoslime&rdquo. Μούχλια λάσπης έχουν βρεθεί σε όλο τον κόσμο και τρέφονται με μικροοργανισμούς που ζουν σε οποιοδήποτε είδος νεκρού φυτικού υλικού. Για το λόγο αυτό, αυτοί οι οργανισμοί βρίσκονται συνήθως στο έδαφος, στους χλοοτάπητες και στο δάσος, συνήθως σε φυλλοβόλα κορμούς. Ωστόσο, σε τροπικές περιοχές είναι επίσης κοινά σε ταξιανθίες, καρπούς και σε εναέριες καταστάσεις (π.χ. στο θόλο των δέντρων). Στις αστικές περιοχές, βρίσκονται σε σάπια φύλλα ή ακόμα και στο καλούπι των φύλλων σε υδρορροές. Τα περισσότερα καλούπια λάσπης είναι μικρότερα από μερικά εκατοστά, αλλά ορισμένα είδη μπορεί να φτάσουν σε μεγέθη έως και αρκετά τετραγωνικά μέτρα και μάζες έως 30 γραμμάρια, και πολλά έχουν εντυπωσιακά χρώματα όπως κίτρινο, καφέ και λευκό.

Τα αληθινά καλούπια πλασμωδιακής λάσπης υπάρχουν στη φύση ως πλασμώδιο, μια πολυπύρηνη μάζα πρωτοπλάσματος με διάμετρο πολλών εκατοστών, χωρίς κυτταρικά τοιχώματα και μόνο μια κυτταρική μεμβράνη για να κρατήσει τα πάντα μέσα. μεμονωμένων πυρήνων που τρέφεται καταπίνοντας την τροφή του (κυρίως βακτήρια) με ψευδοπόδια σε μια διαδικασία που ονομάζεται φαγοκυττάρωση. Έτσι η μούχλα λάσπης καταπίνει την τροφή της και στη συνέχεια την χωνεύει.

Όταν το πλασμώδιο τελειώνει από τροφή ή οι περιβαλλοντικές συνθήκες γίνονται σκληρές, συχνά σχηματίζουν περίτεχνα (συχνά όμορφα) καρποφόρα σώματα φτιαγμένα κυρίως από ανθρακικό ασβέστιο και πρωτεΐνη που παράγουν σπόρια που τους επιτρέπουν να μετακινηθούν σε μια νέα πηγή τροφής. Αυτά αργότερα βλασταίνουν για να σχηματίσουν μη πυρηνικούς αμιμάδες ή μαστιγωμένα κύτταρα σμήνος. Αυτά αργότερα συντήκονται και στη συνέχεια διαιρούνται μιτωτικά για να σχηματίσουν ένα πλασμώδιο, ολοκληρώνοντας τον κύκλο ζωής. Ένα συναρπαστικό πράγμα για τα καλούπια πλασμωδιακής λάσπης είναι ότι τα εκατομμύρια των πυρήνων σε ένα μόνο πλασμώδιο διαιρούνται ταυτόχρονα. Αυτό καθιστά τα καλούπια λάσπης ιδανικά εργαλεία για επιστήμονες που μελετούν τη μίτωση, τη διαδικασία της πυρηνικής διαίρεσης.

Περιστασιακά, κατά τη διάρκεια των βροχερών περιόδων, μεγάλα πλασμώδια (έως και λίγα μέτρα σε διάμετρο) σέρνονται έξω από το δάσος και στα γκαζόν και στους κήπους των ανθρώπων. Το πλασμώδιο μπορεί να είναι άσχημο για κάποιους, αλλά δεν είναι επιβλαβές. Τα καλούπια λάσπης προκαλούν πολύ μικρή ζημιά. Το πλασμώδιο προσλαμβάνει βακτήρια, σπόρια μυκήτων και ίσως άλλα μικρότερα πρωτόζωα. Η κατάποση της τροφής τους είναι ένας λόγος που οι μούχλες λάσπης δεν θεωρούνται μύκητες. Οι μύκητες παράγουν ένζυμα εξωγενώς (έξω από το σώμα τους) που διασπούν την οργανική ύλη σε χημικές ουσίες που απορροφώνται μέσω των κυτταρικών τοιχωμάτων τους και δεν καταπίνονται.

Σε αντίθεση με τα πλασμοδιακά καλούπια λάσπης, τα κυτταρικά καλούπια λάσπης ή οι κοινωνικοί αμειβάδες, περνούν το μεγαλύτερο μέρος της ζωής τους ως μεμονωμένοι μονοκύτταροι οργανισμοί, και όσο υπάρχει αρκετή τροφή (συνήθως βακτήρια), οι αμιμάδες ευδοκιμούν. Ωστόσο, όταν τελειώνει η τροφή, στέλνουν χημικά σήματα στους περιβάλλοντες αμειβάδες, οι οποίοι στη συνέχεια ρέουν προς ένα κεντρικό σημείο, σχηματίζοντας έναν γυμνοσάλιαγκα σαν πολυκύτταρο ψευδοπλασμώδιο (&ldquofalse&rdquo plasmodium), το οποίο μπορεί στη συνέχεια να μεταναστεύσει σαν ένας μόνο οργανισμός. Όταν οι συνθήκες είναι κατάλληλες, το ψευδοπλασμώδιο σταματά να μεταναστεύει και σχηματίζει ένα πολυκύτταρο καρποφόρο σώμα. Μερικά από τα κύτταρα γίνονται σπόρια που διαδίδονται, ενώ τα υπόλοιπα σχηματίζουν κύτταρα μίσχων των οποίων η μόνη λειτουργία είναι να ανυψώνουν τα σπόρια στον αέρα για να πιαστούν πιο εύκολα στα ρεύματα αέρα.

Εργαστήριο-3 01

Αυτή η διαφάνεια δείχνει δύο εξωσκελετούς, ή δοκιμές, από μια ομάδα θαλάσσιων πρωτόζωων που ονομάζονται τρηματοφόρα. Τα κελύφη αυτών των αρχαίων πρωτοζώων, τα οποία αποτελούνται από ανθρακικό ασβέστιο, συσσωρεύονται στους βυθούς της θάλασσας και συμβάλλουν με την πάροδο του χρόνου στο σχηματισμό κιμωλίας και ασβεστόλιθου. Είναι σε μεγάλο βαθμό τα σώματα αυτών των τρηματοφόρων που έχουν σχηματίσει τους Λευκούς βράχους του Ντόβερ της Αγγλίας και ο ασβεστόλιθος που χρησιμοποιήθηκε για την κατασκευή των αιγυπτιακών πυραμίδων.

Εργαστήριο-3 02

Αυτή η διαφάνεια περιέχει έναν αριθμό εξωσκελετών, ή δοκιμών, θαλάσσιων πρωτόζωων που ονομάζονται ραδιολάρια. Αυτά τα όμορφα τεστ, τα οποία είναι άφθονα σε θαλάσσια ιζήματα σε πολλά μέρη του κόσμου, αποτελούνται κυρίως από πυρίτιο.

Εργαστήριο-3 03

Αυτή η διαφάνεια δείχνει πολλά χρωματισμένα δείγματα Amoeba proteus (ο Πρωτέας ήταν ένας ελληνικός θεός που μπορούσε να πάρει διάφορες μορφές). Αυτά τα σχετικά μεγάλα πρωτόζωα χρησιμοποιούν κινητές προεκτάσεις του κυτταροπλάσματος που ονομάζονται ψευδοπόδια για κίνηση και σύλληψη τροφής. Η τροφή που καταναλώνεται περιβάλλεται από ένα κενό τροφής και χωνεύεται από ένζυμα. Οι καθαρές περιοχές που ονομάζονται συσταλτικά κενοτόπια συλλέγουν την περίσσεια νερού από το περιβάλλον κυτταρόπλασμα και την απορρίπτουν στο εξωτερικό του σώματος. Σημειώστε επίσης τους σκουρόχρωμους πυρήνες, οι οποίοι περιέχουν κοκκώδη χρωματίνη και ελέγχουν τις δραστηριότητες αυτών των μονοκύτταρων οργανισμών.

Φωτογραφίες ζωντανών αμοιβάδων

Εργαστήριο-3 04

Αυτή η εικόνα με μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης δείχνει ένα δείγμα ενός ζωντανού αμοιβάδας. Σημειώστε το μεγάλο συσταλτικό κενοτόπιο στην αριστερή πλευρά του οργανισμού. Αυτό το οργανίδιο χρησιμοποιείται για τη συλλογή και την αποβολή της περίσσειας νερού που εισέρχεται στον αμοιβάδα με όσμωση.

Εργαστήριο-3 05

Αυτή η εικόνα με μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης δείχνει μια ζωντανή αμοιβάδα. Σημειώστε τα πολλά τροφικά κενοτόπια που σχηματίζονται μέσα σε αυτό το «καλά τρεφμένο» άτομο καθώς και τις κινητές προεκτάσεις του σώματος που ονομάζονται ψευδοπόδια.

Εργαστήριο-3 06

Αυτή η εικόνα με μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης δείχνει έναν άλλο ζωντανό αμοιβάδα που χρησιμοποιεί το ψευδοπόδιο του (πάνω δεξιά γωνία) για να περιβάλλει ένα θήραμα. Μόλις μπει μέσα, το φαγητό θα εισέλθει στα κενοτόπια τροφής για πέψη.

Εργαστήριο-3 7

Αυτή είναι μια διαφάνεια του μεγάλου και πολύπλοκου βλεφαροφόρου Paramecium caudatum, το οποίο βρίσκεται συχνά σε νερό που περιέχει βακτήρια και οργανική ύλη σε αποσύνθεση. Σημειώστε τον μεγάλο μακροπυρήνα σε σχήμα νεφρού που ελέγχει τις περισσότερες μεταβολικές λειτουργίες του οργανισμού. Κοντά και συχνά μέσα σε μια κοιλότητα του μακροπυρήνα βρίσκεται ο πολύ μικρότερος μικροπυρήνας, ο οποίος εμπλέκεται στην αναπαραγωγή. Όπως και σε άλλα πρωτόζωα του γλυκού νερού, τα συσταλτικά κενοτόπια χρησιμοποιούνται για την απομάκρυνση της περίσσειας νερού που εισέρχεται συνεχώς στον οργανισμό με όσμωση.

Φωτογραφίες του Living Paramecia

Εργαστήριο-3 08

Αυτή η εικόνα μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης δείχνει δύο ζωντανά δείγματα Paramecium caudatum. Σημειώστε το μεγάλο συσταλτικό κενοτόπιο στο πρόσθιο άκρο του οργανισμού στα δεξιά (που δείχνει το κόκκινο βέλος). Αυτό το οργανίδιο χρησιμοποιείται για τη συλλογή και την αποβολή της περίσσειας νερού που εισέρχεται μέσω όσμωσης. Σημειώστε επίσης το στοματικό αυλάκι στην επιφάνεια του οργανισμού. Αυτή η κατάθλιψη οδηγεί σε ένα μόνιμο κυτταρικό στόμα που ονομάζεται κυτοστόμιο μέσω του οποίου τα σωματίδια τροφής εισέρχονται στο πρωτόζωο.

Εργαστήριο-3 09

  1. Διατροφικό κενό
  2. Στοματικό αυλάκι
  3. Μικροπυρήνα
  4. Μακροπυρήνας
  5. Συσταλτικά κενοτόπια

Αυτή η εικόνα μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης δείχνει μια μεγεθυμένη όψη ενός δείγματος Paramecium caudatum. Σημειώστε τον μεγάλο μακροπυρήνα και τον μικρότερο μικροπυρήνα. Τα δύο σταθερά συσταλτικά κενοτόπια που φαίνονται γεμίζουν με υγρό που πρόκειται να αποβληθεί σύντομα. Σημειώστε τους ακτινωτούς σωλήνες αυτού του οργανιδίου που συλλέγουν το υγρό από το κυτταρόπλασμα. Ένα κενό τροφής μπορεί επίσης να φανεί σε αυτό το δείγμα.

Εργαστήριο-3 10

Αυτή η εικόνα μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης δείχνει μια εξαιρετικά μεγεθυμένη άποψη ενός άλλου δείγματος Paramecium caudatum. Σημειώστε τον μεγάλο μακροπυρήνα, τα τροφικά κενοτόπια και δύο σταθερά συσταλτικά κενοτόπια. Τα ακτινικά κανάλια που συλλέγουν νερό από το κυτταρόπλασμα και το μεταφέρουν στο κενοτόπιο φαίνονται εύκολα σε αυτό το δείγμα.

Εργαστήριο-3 11

Αυτή η διαφάνεια δείχνει ένα single Παραμήκιο που είναι διαίρεση στη διαδικασία της ασεξουαλικής αναπαραγωγής που ονομάζεται δυαδική σχάση. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, οι μικροπυρήνες αρχικά διαιρούνται μιτωτικά και στη συνέχεια ανακατανέμονται σε όλο το κυτταρόπλασμα, μετά από το οποίο ο μακροπύρηνας επιμηκύνεται αμιτωτικά σε δύο μισά. Στο δείγμα που φαίνεται, αυτή η διαίρεση του μακροπυρήνα σε δύο διακριτά μισά έχει ολοκληρωθεί.

Εργαστήριο-3 12

Τα μπλε βέλη δείχνουν σε ένα ζευγάρι συζεύξεων

Αυτή η διαφάνεια δείχνει έναν αριθμό χρωματισμένων δειγμάτων Paramecium που εμπλέκονται σε διάφορα στάδια ενός τύπου σεξουαλικής αναπαραγωγής που ονομάζεται σύζευξη. Κατά τη διάρκεια αυτής της διαδικασίας, δύο άτομα διαφορετικών τύπων ζευγαρώματος ενώνονται και σχηματίζουν μια κυτταροπλασματική γέφυρα μεταξύ τους. Αυτό ακολουθείται από ένα πολύπλοκο σύνολο διαιρέσεων και εκφυλισμών των μακροπυρήνων και των μικροπυρήνων που τελικά καταλήγει σε ανταλλαγή γενετικού υλικού μεταξύ των συζεύξεων ανάλογη με τη σεξουαλική αναπαραγωγή που παρατηρείται στους πολυκύτταρους οργανισμούς.

Εργαστήριο-3 13

Τα κόκκινα βέλη δείχνουν στους μακροπυρήνες

Αυτή η διαφάνεια δείχνει δύο χρωματισμένα δείγματα του μεγάλου, σε σχήμα τρομπέτας, βλεφαροφόρου Στέντορ, ενός κοινού κατοίκου λιμνών, λιμνών και ρεμάτων γλυκού νερού. Αν και το Stentor μπορεί να χρησιμοποιήσει τις βλεφαρίδες του για να κινηθεί ενεργά μέσα από τη στήλη του νερού σε αναζήτηση τροφής, συχνά βρίσκεται προσκολλημένο από ένα μακρύ κοτσάνι σε βυθισμένα ραβδιά, πέτρες και βλάστηση όπου χρησιμοποιεί μια σειρά από πολύπλοκα ακτινωτά οργανίδια για να τραβήξει σωματίδια τροφής στο στόμα του. (κυτοστόμιο). Σημειώστε τους μακριούς μακροπυρήνες με χάντρες, των οποίων το μεγάλο μέγεθος πιθανότατα αντικατοπτρίζει τα ειδικά προβλήματα ελέγχου ενός τόσο μεγάλου κυττάρου.

Φωτογραφία ενός Ζωντανού Στάντορ

Εργαστήριο-3 14

Αυτή η εικόνα μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης δείχνει ένα ζωντανό βλεφαροφόρο που ονομάζεται Στέντορ. Σημειώστε το μακρύ σώμα σε σχήμα τρομπέτας αυτού του εξαιρετικά μεγάλου πρωτοζώου καθώς και τον μακροπυρήνα με χάντρες που φέρει τον έλεγχο σε όλα τα μέρη αυτού του μακριού και μεγάλου κυττάρου.

Εργαστήριο-3 15

Αυτή η διαφάνεια δείχνει πολυάριθμα χρωματισμένα δείγματα της βλεφαροειδής Vorticella που είναι προσαρτημένα σε ένα μικρό κομμάτι θραυσμάτων με μακριά συσταλτικά στελέχη. Τα μαξιλάρια γύρω από το στόμα δημιουργούν ρεύματα νερού που τραβούν μικρά σωματίδια τροφής στον οργανισμό.

Φωτογραφία της ζωντανής Vorticella

Εργαστήριο-3 16

Αυτή η εικόνα μικροσκοπίου αντίθεσης φάσης δείχνει μια ζωντανή Vorticella. Σημειώστε το μακρύ μίσχο με το οποίο συνδέεται αυτό το βλεφαρίδικο στο υπόστρωμα (ένα κομμάτι υπολειμμάτων λίμνης). Αν και αυτό το μίσχο μπορεί να φτάσει σε μήκος τα 3.000 μικρά, μπορεί να ανασυρθεί σε κλάσματα του δευτερολέπτου όταν ο οργανισμός διαταραχθεί (δείτε την επόμενη φωτογραφία της σειράς).

Εργαστήριο-3 18

Αυτή η διαφάνεια δείχνει τρία χρωματισμένα δείγματα ενός εξαιρετικά μεγάλου βλεφαροφόρου που ονομάζεται Spirostomum. Αυτό το σπειροειδές πρωτόζωο μπορεί να φτάσει σε μήκος τα 3 mm και έχει ένα εξαιρετικά συσταλτικό σώμα. Όπως το Stentor, έχει επίσης ένα μακρύ μακροπυρήνα με χάντρες.

Εργαστήριο-3 19

Η ζωή στο πεπτικό σύστημα των περισσότερων τερμιτών (και ορισμένων κατσαρίδων) είναι αμοιβαία παραβασαλίδια του γένους Τριχωνύμφα που βοηθούν τους ξενιστές τους να αφομοιώσουν την κυτταρίνη και άλλα δομικά συστατικά του ξύλου. Παραδόξως, τα ίδια τα πρωτόζωα δεν έχουν την ικανότητα να παράγουν κυτταρινάσες και πρέπει να εξαρτώνται από έναν πληθυσμό ενδοσυμβιωτικών βακτηρίων για την παραγωγή αυτών των ενζύμων. Σε αντάλλαγμα για αυτήν την υπηρεσία, τα πρωτόζωα και τα ενδοσυμβίωσά τους επωφελούνται από τη συνεχή παροχή πλούσιας σε ενέργεια κυτταρίνης και από το κατάλληλο περιβάλλον του εντέρου του ξενιστή.

Είναι ενδιαφέρον, αν και Τριχωνύμφα έχει μεγάλο αριθμό τυπικών ευκαρυωτικών μαστιγίων που περιβάλλουν το μεγαλύτερο μέρος του οργανισμού, φιλοξενεί επίσης έναν πληθυσμό κινητών σπειροχαιτών βακτηρίων που προσκολλώνται σε θέσεις στο πρωτόζωο χωρίς μαστίγια. Προς το παρόν, οι ερευνητές δεν είναι βέβαιοι για το ρόλο που παίζουν αυτοί οι εκτοσυμβιώτες στην οικολογία των πρωτοζώων και των rsquos.

Φωτογραφίες ζωντανών μαστιγωτών εντέρων τερμιτών

Εργαστήριο-3 20

Αυτή η εικόνα με μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης δείχνει το μεγάλο πρωτόζωο Trichonympha που κατοικεί στο έντερο των πρωτόγονων τερμιτών. Άλλα μικρότερα ζωομαστιγώματα καθώς και βακτηριακά είδη μπορούν επίσης να φανούν στη διαφάνεια.

Εργαστήριο-3 21

Αυτή η εικόνα με μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης δείχνει μια πιο μεγεθυμένη άποψη του μεγάλου ζωομαστιγώματος Trichonympha που κατοικεί στο έντερο των πρωτόγονων τερμιτών.

Εργαστήριο-3 22

Αυτή η διαφάνεια δείχνει δύο δείγματα Paramecium που έχουν υποστεί επεξεργασία με μια ειδική χρώση που τονίζει μια δομή που ονομάζεται πελίκιο, ένα ημιάκαμπτο εξωτερικό κάλυμμα που παρέχει υποστήριξη για τις βλεφαρίδες που προβάλλουν μέσα από αυτό. Στη διαφάνεια, αυτές οι δομές φαίνεται να αποτελούνται από πολυάριθμες κορυφογραμμές και αυλακώσεις.

Εργαστήριο-3 23

Αυτή η διαφάνεια δείχνει ένα επίχρισμα αίματος που περιέχει το μαστίγιο Trypanosoma brucei που προκαλεί αφρικανική ασθένεια του ύπνου στους ανθρώπους. Αν και υπάρχουν δύο υποείδη του παρασίτου που προκαλούν ελαφρώς διαφορετικές μορφές της νόσου, και τα δύο μεταδίδονται από το δάγκωμα της μύγας τσετσε (Glossina). Πολλά τρυπανοσώματα με μωβ χρώση (που δείχνουν τα μπλε βέλη) μπορούν να φανούν ανάμεσα στα ελαφρώς χρωματισμένα, κυκλικά ερυθροκύτταρα (ερυθρά αιμοσφαίρια). Ένα μεγάλο, σκούρα χρωματισμένο λεμφοκύτταρο (λευκά αιμοσφαίρια) μπορεί επίσης να φανεί στη διαφάνεια.

Εργαστήριο-3 26

Trypanosoma cruzi είναι ένα παρασιτικό πρωτόζωο που προκαλεί τη δυνητικά θανατηφόρα νόσο Chagas&rsquo. Η μετάδοση λαμβάνει χώρα μέσω των δαγκωμάτων του δολοφόνου ή του ζωυφίου &ldquokissing&rdquo (Triatoma) όταν τα κόπρανα που περιέχουν ένα μολυσματικό στάδιο του παρασίτου εναποτίθενται στην επιφάνεια του δέρματος. Επειδή το δάγκωμα μπορεί να προκαλέσει πόνο και κνησμό, τα κόπρανα συχνά γρατσουνίζονται στο τραύμα ή μπορεί να μαζευτούν από το χέρι και να μεταφερθούν στο μάτι, όπου εισέρχονται μέσω της βλεννογόνου μεμβράνης. Η μετάδοση μπορεί επίσης να συμβεί μέσω μεταγγίσεων μολυσμένου αίματος.

Η νόσος Chagas&rsquo παρουσιάζει ένα από τα υψηλότερα νοσήματα στη Λατινική Αμερική. Περίπου 16-18 εκατομμύρια άνθρωποι έχουν μολυνθεί αυτή τη στιγμή, 50.000 από τους οποίους πεθαίνουν κάθε χρόνο. Επί του παρόντος δεν υπάρχουν διαθέσιμα καλά φάρμακα για τη θεραπεία της νόσου, επομένως οι προσπάθειες εξάλειψης περιλαμβάνουν κυρίως τον έλεγχο των φορέων και τον έλεγχο αίματος για την πρόληψη νέων λοιμώξεων.

Εργαστήριο-3 27

Το Trichomonas vaginalis είναι ένα μικρό αναερόβιο, παραβασικό πρωτόζωο που κινείται με τη βοήθεια τεσσάρων μαστιγίων που προεξέχουν από το μπροστινό του άκρο. Έχει επίσης ένα πέμπτο μαστίγιο που εκτείνεται προς τα πίσω από μια κυματοειδή μεμβράνη που επιτρέπει στο παράσιτο να προσκολληθεί και να σχίσει την ουρήθρα ή τα τοιχώματα του κόλπου, προκαλώντας φλεγμονή που βοηθά στην επιτάχυνση και την ενδυνάμωση της μόλυνσης. Οι ενήλικες (που ονομάζονται τροφοζωίτες) ζουν στη συνέχεια στο ουροποιητικό ή αναπαραγωγικό σύστημα, έως ότου περάσουν στον επόμενο ανθρώπινο ξενιστή τους μέσω απροστάτευτου σεξ.

Εργαστήριο-3 25

Leishmania είναι ένα άλλο τρυπανόσωμα που μολύνει τον άνθρωπο. Όπως το Trypanosoma brucei, το παράσιτο απαιτεί δύο ξενιστές για να ολοκληρώσει τον κύκλο ζωής του: ένα θηλαστικό και ένα έντομο. Η λεϊσμανία προκαλεί δύο μορφές ασθένειας: τη δερματική λεϊσμανίαση και τη σπλαχνική λεϊσμανίαση. Το πρώτο συνήθως οδηγεί σε δερματικές βλάβες που συχνά αυτοπεριοριζόμενες. Το τελευταίο είναι πολύ πιο σοβαρό, με αποτέλεσμα συχνά την καταστροφή των φαγοκυτταρικών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος που μπορεί να οδηγήσει σε δευτερογενή μόλυνση και τελικά θάνατο του ανθρώπινου ξενιστή.

Εργαστήριο-3 24

Αυτή η διαφάνεια δείχνει ένα επίχρισμα αίματος που έχει ληφθεί από ένα άτομο μολυσμένο με ελονοσία, το οποίο προκαλείται από το παράσιτο apicomplexan Plasmodium. Αν και τα περισσότερα από τα ερυθρά αιμοσφαίρια στο επίχρισμα φαίνονται φυσιολογικά, παρατηρήστε ότι το κύτταρο έχει μολυνθεί με ένα στάδιο ενδοκυτταρικής τροφοδοσίας του παρασίτου που ονομάζεται τροφοζωίτης (1). Αφού τρέφεται με τα ερυθρά αιμοσφαίρια και την αιμοσφαιρίνη, το παράσιτο υφίσταται μια μορφή ασεξουαλικής αναπαραγωγής που ονομάζεται σχιζογονία (πολλαπλή σχάση), η οποία έχει ως αποτέλεσμα την παραγωγή ενός αριθμού πυρήνων που φαίνονται στα ερυθρά αιμοσφαίρια (2) πάνω και στα αριστερά του τροφοζωίτης. Αφού ολοκληρωθεί η κυτταροκίνηση, το κύτταρο θα σπάσει και θα απελευθερώσει νεοσχηματισμένα θυγατρικά κύτταρα που ονομάζονται μεροζωίτες. Είναι η σύγχρονη καταστροφή πολλών ερυθροκυττάρων και η απελευθέρωση του περιεχομένου τους που προκαλούν τις εναλλασσόμενες κρίσεις πυρετού και ρίγους χαρακτηριστικές αυτής της εξουθενωτικής ασθένειας.

Εργαστήριο-3 28

Αυτή η εικόνα δείχνει ένα μοντέλο ενός σχετικά μεγάλου πρωτόζωου που ονομάζεται αμοιβάδα. Οι Amebas χρησιμοποιούν κινητές προεκτάσεις του κυτταροπλάσματος που ονομάζονται ψευδοπόδια (4) για κίνηση και σύλληψη τροφής. Τα πρωτόζωα που σχηματίζουν ψευδοπόδια έχουν δύο τύπους κυτταροπλάσματος, ένα εξωτερικό, πιο παχύρρευστο τμήμα που ονομάζεται εκτόπλασμα και ένα εσωτερικό, πιο ρευστό τμήμα που ονομάζεται ενδοπλάσμα. Όταν αρχίζει να σχηματίζεται ένα ψευδοπόδιο, εμφανίζεται ένας καθαρός χώρος στην πρόσθια άκρη του ψευδοπόδρου που ονομάζεται υαλώδες κάλυμμα (5). Αφού συμβεί αυτό, το ενδοπλάσμα αρχίζει να ρέει σε αυτόν τον χώρο, προκαλώντας την ώθηση του ψευδοπόδρου προς τα εμπρός μέσω του μέσου. Εκτός από τον κινητικό τους ρόλο, τα ψευδοπόδια μπορούν να χρησιμοποιηθούν για να καταπιούν το θήραμα σε μια διαδικασία γνωστή ως φαγοκυττάρωση. Μόλις καταποθεί, η τροφή εισέρχεται στα τροφικά κενοτόπια (3) όπου χωνεύεται από ένζυμα που απελευθερώνονται από τα λυσοσώματα. Οι καθαρές περιοχές που ονομάζονται συσταλτικά κενοτόπια (2) συλλέγουν την περίσσεια νερού που εισέρχεται μέσω όσμωσης από το περιβάλλον κυτταρόπλασμα και την εκκενώνουν στο εξωτερικό του σώματος. Σημειώστε επίσης τον σκουρόχρωμο πυρήνα (1), ο οποίος ελέγχει τις δραστηριότητες αυτού του μονοκύτταρου οργανισμού.

Εργαστήριο-3 29

Αυτή η εικόνα δείχνει ένα μοντέλο του μεγάλου, πολύπλοκου βλεφαροφόρου πρωτόζωου που είναι γνωστό ως Paramecium. Αυτοί οι μονοκύτταροι οργανισμοί βρίσκονται συχνά σε νερό που περιέχει βακτήρια και οργανική ύλη σε αποσύνθεση. Σημειώστε τον μεγάλο μακροπυρήνα σε σχήμα νεφρού (1) που ελέγχει τις περισσότερες από τις μεταβολικές λειτουργίες του οργανισμού. Κοντά στον (και συχνά μέσα σε μια κοιλότητα στον μακροπυρήνα) βρίσκεται ο πολύ μικρότερος μικροπυρήνας (2), ο οποίος εμπλέκεται στην αναπαραγωγή. Όπως και σε άλλα πρωτόζωα του γλυκού νερού, τα συσταλτικά κενοτόπια (4) χρησιμοποιούνται για την απομάκρυνση της περίσσειας νερού που εισέρχεται στον οργανισμό με όσμωση. Εκτός από αυτά τα οργανίδια, σημειώστε την βλεφαροειδή στοματική αύλακα (5) που κατευθύνει την τροφή σε ένα μόνιμο άνοιγμα που ονομάζεται κυτοστόμιο ή κυτταρικό στόμα (6). Μόλις εισέλθει στο κύτταρο, η τροφή περιβάλλεται από κενοτόπια τροφής (3) και πέπτεται από ένζυμα που απελευθερώνονται από τα λυσοσώματα. Ορισμένα είδη διατηρούν επίσης ένα μόνιμο άνοιγμα προς τα έξω που ονομάζεται cytoproct ("πρωκτός κυττάρων"). Κάτω από την πλασματική μεμβράνη βρίσκεται μια άκαμπτη αλλά εύκαμπτη δομή που ονομάζεται πολτός και παρέχει υποστήριξη στο πρωτόζωο, επιτρέποντάς του να διατηρήσει το σχήμα του. Ενσωματωμένα μέσα σε αυτό το πολτό είναι οι βλεφαρίδες που προβάλλουν μέσα από αυτό καθώς και πολυάριθμες νηματοειδείς δομές που ονομάζονται τριχοκύστεις (7). Μετά από μηχανική ή χημική διέγερση, αυτές οι τριχοκύστεις μπορούν να αποφορτιστούν (όπως φαίνεται στο μοντέλο) για να παράγουν μακριά, κολλώδη πρωτεϊνικά νήματα που παραμένουν προσκολλημένα στον οργανισμό. Πιστεύεται ότι αυτές οι δομές μπορούν να χρησιμοποιηθούν για άμυνα.


Microscopic Life Science Project

Πειραματιστείτε με τα Πρωτόζωα

Δεν είναι εξωγήινοι από άλλο πλανήτη, παρά το όνομα! Τα πρωτόζωα είναι μονοκύτταρα (μονοκύτταρα). Είναι επίσης ευκαρυωτικά, που σημαίνει ότι οι πυρήνες των κυττάρων τους είναι εγκλεισμένοι σε μεμβράνες, σε αντίθεση με τα προκαρυωτικά βακτήρια. Ζουν στο νερό (ή υδατώδεις ιστούς μέσα στο σώμα, στην περίπτωση ορισμένων ασθενειών) και ταξινομούνται στο δικό τους βασίλειο. Ίσως να έχετε ακούσει για μερικούς από αυτούς τους πρωτεργάτες στο παρελθόν: αμοιβάδα, ευγλένα, παραμέσιο, δινομαστιγώματα, μούχλα λάσπης και ακόμη και τα περισσότερα φύκια. Μπορείτε είτε να συλλέξετε το δικό σας νερό της λίμνης για μελέτη είτε να χρησιμοποιήσετε ένα κιτ καλλιέργειας.

Ο, τι χρειάζεσαι:

Τι κάνεις:

Εάν χρησιμοποιείτε κιτ καλλιέργειας πρωτόζωων, οι πρωτεργάτες θα αρχίσουν συνήθως να εμφανίζονται μετά από 24 ώρες με τη μεγαλύτερη ποικιλία μετά από περίπου 3 ημέρες. Διαφορετικά πλάσματα θα αναπτυχθούν σε διαφορετικά βάθη του φλυτζανιού νερού σας, γι' αυτό πάρτε δείγματα από διαφορετικά μέρη του φλυτζανιού.

  1. Χρησιμοποιήστε μια πιπέτα για να πάρετε ένα δείγμα από το νερό και τοποθετήστε 1-2 σταγόνες σε μια απλή αντικειμενοφόρο πλάκα μικροσκοπίου. Καλύψτε τις σταγόνες με μια καλυπτρίδα.
  2. Εξετάστε τη διαφάνεια με το μικροσκόπιό σας ξεκινώντας από το 40x. Οι περισσότεροι πρωτεργάτες έχουν λίγο χρώμα και είναι δύσκολο να φαίνονται σε έντονο φως, επομένως στρέψτε το διάφραγμα του μικροσκοπίου σας στη χαμηλότερη ρύθμιση φωτός. Θα χρειαστεί υπομονή για να ρυθμίσετε τον φωτισμό και να εστιάσετε το μικροσκόπιο.
  3. Αρχικά θα δείτε πολύ μικροσκοπικές κουκκίδες να κινούνται στη διαφάνεια. Κάποιοι κινούνται πολύ γρήγορα, άλλοι πιο αργά. Μπορείτε να τα επιβραδύνετε για παρατήρηση προσθέτοντας μια σταγόνα μεθυλοκυτταρίνης ή μπορείτε να τοποθετήσετε μερικές ίνες από ένα βαμβάκι στη διαφάνεια. Οι ίνες θα λειτουργήσουν ως εμπόδια για να εμποδίσουν τους πρωτεργάτες να απομακρυνθούν πολύ γρήγορα από το οπτικό πεδίο.
  4. Μόλις βρείτε μια περιοχή δραστηριότητας πρωταγωνιστή στη διαφάνεια, γυρίστε τη μεγέθυνση έως και 100x ή ακόμα και 400x για να τις δείτε καλύτερα.
  5. Εάν δεν φαίνονται ζώα, δοκιμάστε ξανά κάθε επόμενη μέρα. Πολλές συνθήκες, όπως η σκληρότητα του νερού, η θερμοκρασία και η οξύτητα του νερού, μπορούν να επηρεάσουν τον ρυθμό ανάπτυξης και ανάπτυξης αυτών των οργανισμών. Κάθε επόμενη μέρα θα βρείτε συνήθως περισσότερες και διαφορετικές ποικιλίες πρωτοζώων στην κουλτούρα σας. Αρχικά θα επικρατήσουν μικρότερα είδη. Όσο περνούν οι μέρες θα εμφανιστούν μεγαλύτερα είδη. Θα δείτε επίσης να εμφανίζονται διάφορες μορφές φυκιών. Ορισμένα είδη θα είναι πιο κοινά από την κορυφή του κυπέλλου και άλλα από κοντά στο κάτω μέρος. Σταδιακά, οι συνθήκες τροφής και νερού θα αλλάξουν, επηρεάζοντας τους ρυθμούς ανάπτυξης και ανάπτυξης των διαφορετικών πρωτόζωων.

Τι να ψάξω:

Τύπος κίνησης: Τα πρωτόζωα χρησιμοποιούν διαφορετικές μεθόδους μετακίνησης και συνήθως κατηγοριοποιούνται με βάση τον τρόπο που κινούνται. Μια αμοιβάδα χρησιμοποιεί αργό αμοιβοειδές κίνηση, που ρέει μαζί με ψευδόποδα ή προσωρινές επεκτάσεις που μοιάζουν με τα πόδια. Ένα μέρος του κυτταρικού του τοιχώματος ρέει έξω, μοιάζει με πόδι, και στη συνέχεια τραβάει την υπόλοιπη αμοιβάδα πίσω του. (Αυτός είναι και ο τρόπος με τον οποίο κινούνται τα λευκά αιμοσφαίρια στο σώμα μας.) Πλάσματα σαν ευγλένα κινούνται γρήγορα μαστιγώνω κίνηση. Προωθούνται με ένα ή δύο μαστίγια που μοιάζουν με μαστίγιο. Άλλοι πρωτίστες, όπως το paramecium, χρησιμοποιούν βλεφαροειδής κίνηση. Καλύπτονται με μικροσκοπικές κλωστές που μοιάζουν με τρίχες που ονομάζονται βλεφαρίδες που χτυπούν μπρος πίσω ρυθμικά, προωθώντας τις μέσα στο νερό. Τα μαστίγια και οι βλεφαρίδες μπορεί να είναι δύσκολα ορατά—προσπαθήστε να μειώσετε το φως που εισέρχεται στο μικροσκόπιο και να αυξήσετε τη μεγέθυνση.

Τρόπος διατροφής: Οι διατροφικές συνήθειες μεταξύ των πρωτόζωων ποικίλλουν επίσης. Ορισμένοι πρωτίστες, όπως το euglena ή το volvox (ένας τύπος φυκιών), χρησιμοποιούν χλωροπλάστες για να παράγουν ενέργεια μέσω της φωτοσύνθεσης, παρόμοια με τα φυτά. Η Euglena χρησιμεύει επίσης ως αποσυνθετικά, τρέφοντας νεκρούς οργανισμούς. Η αμοιβάδα, από την άλλη, καταπίνει τη λεία της με τα ψευδοπόδια της και φέρνει την τροφή στο τροφικό κενό της (ένας σάκος όπου αποθηκεύεται η τροφή μέχρι να αφομοιωθεί). Ένα paramecium σαρώνει την τροφή του κάτω από μια στοματική αύλακα που είναι επενδεδυμένη με βλεφαρίδες σε ένα στόμιο που κλείνει όταν είναι γεμάτο και μετατρέπεται σε κενό τροφής.


Ποντικών και ανδρών: είναι δισεκατομμύρια θύματα του νου ελέγχου του τοξόπλασμα;

Toxoplasma gondii κατοικεί σιωπηλά στους εγκεφάλους δισεκατομμυρίων από εμάς σε όλο τον κόσμο. Για μεγάλο χρονικό διάστημα, μόλυνση με T. gondii θεωρήθηκε ακίνδυνο, αλλά πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι ρυθμίζει τα επίπεδα νευροδιαβιβαστών, αλλάζοντας την προσωπικότητα και τη συμπεριφορά για να αυξήσει την ευκαιρία του για περαιτέρω μετάδοση.

Ενημέρωση για την πολιτική για την ελονοσία

Η ελονοσία είναι μια μολυσματική ασθένεια που προκαλείται από έναν μονοκύτταρο παρασιτικό οργανισμό, Πλασμώδιο, που μολύνει το αίμα και το συκώτι.

Φίλοι με οφέλη, ή εκμετάλλευση;

Οι ενδοσυμβιώσεις – όπου ένα είδος ζει μέσα σε ένα άλλο – βρίσκονται σε όλη τη μικροβιολογία. For example, Zooxanthellae are protozoa that live inside corals, the marine invertebrates that build coral reefs.

An ancient remnant inside the malaria parasite

Malaria is caused by protozoan parasites of the Πλασμώδιο γένος. These parasites are transmitted via mosquito bites, and several different species are known to infect humans. But look inside a Πλασμώδιο cell itself and you find something rather unexpected – a cellular structure that looks remarkably like a chloroplast.


Θεωρία Κυττάρου

The microscopes we use today are far more complex than those used in the 1600s by Antony van Leeuwenhoek, a Dutch shopkeeper who had great skill in crafting lenses. Παρά τους περιορισμούς των αρχαίων πλέον φακών του, ο van Leeuwenhoek παρατήρησε τις κινήσεις της protista (ένας τύπος μονοκύτταρου οργανισμού) και του σπέρματος, τα οποία συλλογικά ονόμασε «ζώα».

Σε μια δημοσίευση του 1665 που ονομάζεται Μικρογραφία, ο πειραματικός επιστήμονας Robert Hooke επινόησε τον όρο «κύτταρο» για τις δομές που μοιάζουν με κουτί που παρατήρησε όταν έβλεπε ιστό φελλού μέσω ενός φακού. Στη δεκαετία του 1670, ο van Leeuwenhoek ανακάλυψε βακτήρια και πρωτόζωα. Οι μετέπειτα πρόοδοι στους φακούς, την κατασκευή μικροσκοπίου και τις τεχνικές χρώσης επέτρεψαν σε άλλους επιστήμονες να δουν ορισμένα συστατικά μέσα στα κύτταρα.

Στα τέλη της δεκαετίας του 1830, ο βοτανολόγος Matthias Schleiden και ο ζωολόγος Theodor Schwann μελετούσαν ιστούς και πρότειναν την ενοποιημένη κυτταρική θεωρία, που δηλώνει ότι όλα τα έμβια όντα αποτελούνται από ένα ή περισσότερα κύτταρα, το κύτταρο είναι η βασική μονάδα της ζωής και νέα κύτταρα προκύπτουν από τα υπάρχοντα κύτταρα. Ο Rudolf Virchow συνέβαλε αργότερα σε αυτή τη θεωρία.

Κυτταροτεχνολόγος

Figure 3. These uterine cervix cells, viewed through a light microscope, were obtained from a Pap smear. Normal cells are on the left. The cells on the right are infected with human papillomavirus (HPV). Notice that the infected cells are larger also, two of these cells each have two nuclei instead of one, the normal number. (credit: modification of work by Ed Uthman, MD scale-bar data from Matt Russell)

Have you ever heard of a medical test called a Pap smear (shown in Figure 3)? Σε αυτό το τεστ, ένας γιατρός παίρνει ένα μικρό δείγμα κυττάρων από τον τράχηλο της μήτρας ενός ασθενούς και το στέλνει σε ένα ιατρικό εργαστήριο όπου ένας κυτταροτεχνολόγος χρωματίζει τα κύτταρα και τα εξετάζει για τυχόν αλλαγές που θα μπορούσαν να υποδεικνύουν καρκίνο του τραχήλου της μήτρας ή μικροβιακή λοίμωξη.

Κυτταροτεχνολόγοι (cyto = «κύτταρο») είναι επαγγελματίες που μελετούν κύτταρα μέσω μικροσκοπικών εξετάσεων και άλλων εργαστηριακών εξετάσεων. Εκπαιδεύονται να προσδιορίζουν ποιες κυτταρικές αλλαγές είναι εντός των φυσιολογικών ορίων και ποιες είναι μη φυσιολογικές. Their focus is not limited to cervical cells they study cellular specimens that come from all organs. Όταν παρατηρούν ανωμαλίες, συμβουλεύονται έναν παθολόγο, ο οποίος είναι γιατρός που μπορεί να κάνει μια κλινική διάγνωση.

Οι κυτταροτεχνολόγοι διαδραματίζουν ζωτικό ρόλο στη διάσωση των ζωών των ανθρώπων. Όταν οι ανωμαλίες ανακαλυφθούν έγκαιρα, η θεραπεία του ασθενούς μπορεί να ξεκινήσει νωρίτερα, γεγονός που συνήθως αυξάνει τις πιθανότητες επιτυχούς έκβασης.

In Summary: Microscopy

Ένα κύτταρο είναι η μικρότερη μονάδα ζωής. Τα περισσότερα κύτταρα είναι τόσο μικροσκοπικά που δεν φαίνονται με γυμνό μάτι. Ως εκ τούτου, οι επιστήμονες χρησιμοποιούν μικροσκόπια για τη μελέτη των κυττάρων. Τα ηλεκτρονικά μικροσκόπια παρέχουν μεγαλύτερη μεγέθυνση, υψηλότερη ανάλυση και περισσότερες λεπτομέρειες από τα μικροσκόπια φωτός. Η θεωρία των ενοποιημένων κυττάρων δηλώνει ότι όλοι οι οργανισμοί αποτελούνται από ένα ή περισσότερα κύτταρα, το κύτταρο είναι η βασική μονάδα ζωής και τα νέα κύτταρα προκύπτουν από τα υπάρχοντα κύτταρα.


Under the microscope

With over 150 species to the Euglena family, there are minor differences among species. Many of the euglenoid species are somewhat tear-drop shaped. The blunt portion of the body is the anterior ‘head’ of the organism the more pointed part is the posterior section. Some pictures taken of Euglena specimens seem to show the posterior portion as being larger and more rounded. Other euglenoid species are ovoid in shape.

The only way to really tell the posterior from the anterior part of the body is where you locate the flagella. Euglenids have two flagella or whip-like structures located at the anterior end. The emergent flagellum tends to be longer than the other and is used to pull the organism through the water as it seeks out light or food. Sometimes the smaller of the two flagella may be seen but many times it is contained inside the Euglena in a reservoir. The flagella are usually best seen under a high-powered microscope.

Euglenids have no rigid cell wall to maintain a solid shape. The cytoplasm and organelles of the organism are held in by a plasma membrane. Under that and giving the outside ‘skin’ of the protozoa a ridged appearance is a pellicle. Viewed under a high power microscope, the pellicle has the contours of corrugated cardboard with crinkles and indentations. The raised portions of the pellicle are strips composed of protein and with a microtubule in each one. In some species of Euglena the strips extend the length of the organism’s body. In some euglenids, the pellicle ridges appear more like a corkscrew design. In Euglenas with that sort of strip placement, the organism can sometimes be seen wriggling through the water instead of using its flagella for locomotion. The wriggling movement is called metaboly.

In euglenids which photosynthesize, an eyespot or stigma may be seen in the anterior portion of the organism’s body. The eyespot appears red under the microscope and is used by the creature to sense where to move to get the most light. It is one of the most easily identifiable parts of a euglenid.

When you examine euglenids under the microscope, you will see a number of different-shaped spots throughout their bodies. These are the chloroplasts, paramylon bodies, contractile vacuoles and nucleus.

Not all euglenids are green. The ones that are have chloroplasts which contain chlorophyll a and sometimes chlorophyll b. Chlorophyll a is responsible for a green grass type of hue and is most responsible for photosynthesis. Sometimes a euglenid’s chloroplasts will contain chlorophyll b which is more of a bluish-green hue and increases the ability of the organism to absorb light by increasing the spectrum of light which can be utilized. Some euglenids which are colorless or reddish in color have carotenoids as pigments which display as yellow, orange or red. Chloroplasts can be just about any shape and size but are easy to see throughout the Euglena’s body.

The euglenids which have the added ability to ingest rotifers, paramecium or amoebas have gullets. This is used mainly when the euglenid is in darker conditions for prolonged periods of time and cannot photosynthesize.

You may also see several paramylon bodies, organelles which store starch-like carbohydrates in the form of a glucose compound produced through photosynthesis and used for reserve energy.

Contractile vacuoles in the euglenid’s body collect excess fluids and transfer them to the external environment. Without those organelles, the creature would grow too large for its plasma membrane and explode. These are found in freshwater euglenids.

The most important organelle in the euglenid’s body is the nucleus. It is a large circular structure found somewhere between the center to posterior of the organism. If your microscope is powerful enough, you may see one or more nucleoli or endosomes inside the nucleus and dot-like chromosomes sprinkled throughout the organelle. The nucleus regulates the activities of the euglenid and contains the DNA blueprint for reproduction.

Watch any video of the movement of a Euglena through the water and you will be captivated by this aquatic microorganism with the red eyespot.


The Biology and Identification of the Coccidia Apicomplexa of Rabbits of the World

Συγγραφέας: Donald W. Duszynski,Lee Couch
Publsiher: Elsevier Science Limited
Total Pages: 340
Ελευθέρωση: 2013
ISBN 10: 9780123978998
ISBN 13: 0123978998
Γλώσσα: EN, FR, DE, ES & NL

The Biology and Identification of the Coccidia (Apicomplexa) of Rabbits of the World is a taxonomic summation of a damaging intestinal parasite found in rabbits and transmissible to other species, including humans. This book conceptually and historically summarizes the world's literature on the parasite and also provides a quick guide to isolation procedures, identification, strategies for management, and available chemotherapy. It is a vital source of knowledge about coccidia's real and potential transmission to humans, which can lead to dangerous health problems, like severe dehydration, vomiting, lethargy and even death. Coccidiosis is an intestinal disease that affects several different animal species, including canines and humans, and is one of the most prevalent protozoal infections in North America. The causative agent is a protozoan that has the ability to multiply rapidly and cause major damage in the intestinal wall, rupturing the cells of the intestinal lining. The final stage, the oocyst, is extremely resistant to environmental stress and is difficult to completely remove from the environment. Oocysts are frequent contaminants of feed and water and when the sporulated oocysts are ingested by other animals, they start the life cycle over in the new host. With the demand for rabbits in scientific research and for rabbit meat for human consumption increasingly globally each year, rabbits are of epidemiologic significance for laboratory workers, university researchers, veterinarians, pet owners, and breeders. Evaluates the scientific and scholarly merit of each of the publications written about coccidian from every rabbit species, providing a complete historical rendition A treatise for the identification of coccidia and their treatment as needed Written in a style that can be understood by most educated lay persons and laboratory workers Written by the first ranked author team among the world-class parasitologists who study coccidia Combined in one single source, this book follows the gold standards in coccidian biology and identification Brings all that information together in one volume and solves the problems faced by researchers, veterinarians, students and others in trying to find and navigate through this scattered literature


Identification of protozoa under microscope - Biology

prepared slides of paramecium, amoeba, euglena, stenor, radiolarians

The Kingdom Protista are single-celled organisms that have a true nucleus (eukaryotic). Protista may be either autotrophic or heterotrophic. Movement by protists is dependent upon certain physical characteristics. Some protozoa have pseudopodia which can extend the cell membrane and push forward or surround a food particle, such as an amoeba does. A protist that possesses a single tail-like structure is called a flagellate. The flagellum will beat back and forth and propel the organism through the water, examples are trypanosome and trichosomes. Some Protozoa are covered with tiny hair-like structures called cilia which move back and forth quickly propelling the organisms through the water. A paramecium is an example of a ciliate. Some Protozoa have axopodia, or pencil-like structures, that help them to be planktonic or floaters in the water. Radiolaria are marine examples of protozoa containing this feature.

There are many debates about whether protozoa are all one-celled organisms or whether they are all one-celled organisms that are heterotrophs. Scientists who study these groups, debate on how to classify some of these organisms, like euglena and dinoflagellate. With more study these groups will be better understood.

Most protozoa are helpful in that they are important in lower levels of the food chain. They provide food for living things such as snails, clams, and sponges. Some protozoa are capable of causing diseases in humans and other animals. Some diseases caused by protozoa in humans are malaria, black fever, sleeping sickness, and some types of diarrhea.

Protista are single-celled organisms that have a true nucleus (eukaryotic). Protista may be either autotrophic or heterotrophic. Movement in protista is dependent upon certain physical characteristics. Some protozoa have pseudopodia which can extend its cell membrane and push itself forward or surround a food particle. A protozoa that possesses a single tail-like structure is called a flagellate. The flagella will beat back and forth and propel the organism through the water, examples are trypanosome and trichosomes. Protozoa that are covered with tiny hair-like structures called cilia move back and forth quickly propelling the organism through the water. Paramecium are examples of ciliates. Protozoa that have axopodia, or pencil like structures, help these protozoa to be planktonic or floaters in the water. Radiolaria are marine examples of protozoa containing this feature.

There are many debates about whether protozoa are all one celled organisms or whether they are all one celled organisms that are heterotrophs. Different textbooks will no doubt show this difference of opinion. Scientists who study these groups are not sure where they place some of these organisms, like euglenas, dinoflagellates, and many others. With more study the position of these groups will be understood more, but until then, give your students the sense that this is a not well understood portion of biology.

Most protozoa are helpful in that they are important in lower levels of the food chain. They provide food for living things such as snails, clams, sponges. Some protozoa are capable of causing diseases in humans and other animals. Some diseases caused by protozoa in humans are malaria, black fever, sleeping sickness, and some types of diarrhea.

Students will use the light microscope to look at prepared samples. Have them follow the lab procedures on their activity sheet. The first lab will consist of prepared samples and the second lab 9 will have students look at live materials.


Permanent staining of fecal smears

The samples (e.g. feces, duodenal aspirates, rectosigmoidoscopy specimens and other materials) that are meant for permanent staining must be fixed immediately after passage to maintain the morphological characteristics of the intestinal protozoa and obtain a correct staining .

Schaudinn s fixed specimen

- Smear the specimen on a slide using a wood, plastic or glass applicator rod, making thicker (rolled) and thinner (smeared) areas.

- Without allowing the smear to dry, place the slide immediately in Schaudinn's working solution (R5) for at least 1 hour (overnight is better).

It is recommended to fix the remaining material in SAF or PVA solutions.

For trichrome or iron-hematoxylin staining of specimens fixed in Schaudinn's solution, proceed from point 1 below.

Trichrome stain (Wheatley's modification of the Gomori method)

Preparation of smears from PVA-fixed specimens

Fix the specimen (after homogenization) in PVA solution for at least 30 min. Stir well, then remove 1-2 ml of the suspension with a pipette, pour it onto a sheet of paper towel and allow the excess PVA to be absorbed for 3 min (do not skip this step). With an applicator rod (plastic, wood or glass), take the fecal material from the paper towel and put it on a slide. Then, with the same rod, form thicker (rolled) and thinner (smeared) areas on the slide. Leave to dry for at least 2 h in a 37 C incubator or overnight at room temperature. These slides can be stored for at least one month at room temperature.

For occasional use (or when few slides are stained at one time), staining can be carried out using a Coplin jar.

1- Place slides in iodine tincture for 5 min. (R14)

2- Place slides in 70% ethanol for 2 min.

3- Place slides in 50% ethanol for 2 min.

4- Place slides in undiluted stock trichrome stain for 15 min. (R15)

5- Drain slides after staining by blotting on paper towel and dip them for a few seconds in destaining solution (R16) (only 2 immersions).

6- Place in 95% ethanol, shaking for 30 s.

7- Place in absolute ethanol for 5 min.

8- Place in absolute ethanol for 5 min.

9- Place in xylene for 5-10 min.

Mount in resinous mounting medium or using the alternative method (Δες παρακάτω).

Preparation of smears from SAF-fixed specimens

1- Fix the thoroughly homogenized fecal specimen in SAF solution (R4) for at least 30 min.

2- Mix well, take 2-3 ml of suspension and allow to sediment spontaneously in a centrifuge tube for less than 1 minute, then pour off the supernatant into another tube.

3- Fill the tube with saline and centrifuge for 2 min at 500 x σολ. Discard the supernatant and repeat washing at least 4-5 times.

4- After the last centrifugation, discard all the saline.

5- Carefully homogenize the washed sediment with a rod, take a drop of sediment and mix it with a drop of Mayer's albumin (R17) previously placed on a slide.

6- With the same rod, smear the material on the slide and form thicker (rolled) and thinner (smeared) areas. Leave to dry completely at room temperature generally a few hours are enough, depending on the amount of saline present in the sediment, on the quantity of Mayer's albumin, and on the room temperature and humidity. Do not stain the slides if they are still shiny or wet, because the material can detach from the slide during staining. Slides can be stored for at least two weeks at room temperature away from dust.

7- Stain slides with trichrome as described for PVA-fixed specimens, above, starting from point 2.

Microscopic examination and interpretation

Even if all the procedures described above are carried out properly, unexpected problems may generate disappointing results and make the preparation difficult to read. Therefore, for all permanent staining procedures, it is important to include a control slide with known protozoa (preferably a specimen containing Dientamoeba fragilis , for its particularly delicate nuclear structure). However, control slides stored for a long time may dehydrate (the moisture of the specimen is retained by the glycerin within Mayer's albumin). If this occurs, the result is a pale staining of the control slide. If specimens with known protozoa are not available, include a negative control slide of PVA- or SAF-fixed stool without protozoa, but to which a buffy coat of white blood cells has been added.

Examine the smear at low power (40x objective) identifying the areas of uniform thickness in order to assess the overall staining. Then, proceed to oil immersion observation (100x objective) and examine at least 300 microscopic fields before concluding that a specimen is negative.

- In well-stained smears, the chromatic features of the organisms stand out against the background of the preparation, making them more visible than with hematoxylin staining

- The cytoplasm of the trophozoites is stained blue-green or green, although in some cases it takes on purple shades

- Entamoeba coli cysts show a brighter red-purple color than cysts of Entamoeba histolytica/dispar/moshovskii and other amoebae

- Cysts are often surrounded by a clear halo because they shrink during the fixing process: to determine the original size of the cyst, always measure the diameter of the surrounding halo

- Nuclear chromatin, the karyosome and inclusion bodies (chromatoid bodies, red blood cells and bacteria) stain red or red-purple, as do the fibrils ( flagellar remnants) of flagellates

- Charcot-Leyden crystals stain red

- Yeast and Blastocystis stain green, the latter with red nuclei on a thin rim of cytoplasm

- Vacuoles or glycogen masses do not stain.

Trichrome stain provides best results using specimens fixed with Schaudinn's solution or PVA the use of SAF fixative gives poor results.

Notes on trichrome staining

- Slides can remain for 24 hour in the solutions indicated in points 2, 8 and 9 without affecting the quality of the staining.

- The removal of mercuric chloride from specimens fixed with Schaudinn's solution or PVA is achieved using an iodine tincture. This solution should be made fresh at least weekly or whenever its color becomes clear. If this is not done, a highly refractive precipitate of crystals or granules will form and make smear examination difficult or impossible.

- Incomplete removal of iodine causes a predominant green staining of the smear. Change frequently the 70% ethanol solution at point 2 or lengthen the time of this step.

- The transition from point 3 to point 4 of the staining process may cause ethanol to enter the trichrome stain, diluting it. To avoid this, drain smears on a paper towel before placing them in the trichrome stain.

- To check the quality of the staining solution, tilt the tank slightly to see if the moist rim is redif not, regenerate the solution by leaving the tank uncovered overnight to evaporate off any ethanol present then refill to the original level with new stock trichrome solution.

- Although trichrome stain is progressive, the best results are obtained with regressive staining, i.e. using a destaining solution. Excessive destaining (it is easy to over-differentiate - point 5) causes poor differentiation of the parasites, even when the specimens stain well. For example, the granular nuclear chromatin appearance of Dientamoeba fragilis will be difficult to detect and may generate confusion with other amoeba species (e.g. Ενταμόμπα hartmanni ). Contrarily, in over-stained specimens (little differentiation), the nuclear chromatin may appear as a compact blob, not formed of granules, thereby causing confusion with Endolimax nana ή Iodamoeba buetschlii .

- In the final dehydration phase, the ethanol solution should be absolute (100%), i.e. completely free of water. If, after the passage from 100% ethanol to xylene , the latter becomes opaque, dip the slide once more in new 100% ethanol and then in new xylene .

- If the result of the staining is unsatisfactory and if it is not possible to get a new specimen, restain the slides as follows:

o Place smears mounted with resinous mounting medium into xylene for at least 12-24 hours, until the coverslips detach from the slides

o Dip slides in absolute ethanol (1 min), 95% ethanol (1 min), 70% ethanol (1 min) and finally in 50% ethanol (1 min)

o Destain smears in 10% acetic acid for several hours

o Wash by soaking in tap water for 3 min (change at least 4-5 times)

o Dip in 70% ethanol (1 min) and 50% ethanol (1 min)

o Now repeat trichrome staining from point 4.

If you wish to examine the smear with the oil immersion objective, immediately after staining without permanent mounting – which requires a waiting time of at least 24-36 hours for drying, an alternative mounting method can be used and permanent mounting can be carried out later.

Alternative mounting method

- Remove slides from the xylene and leave to air dry in horizontal position.

- Place some drops of immersion oil on the smear, allow the oil to spread evenly and leave for about 10 min

- Place a coverslip, add one more drop of immersion oil, and examine at high power (100x objective).

Never examine smears without coverslip. After dehydration, the stained fecal smears are very fragile. In addition, without using a protective coverslip, the lens of the high power objective (100x) can be irreparably damaged. In any case, the transparency and brightness of the preparation mounted with this alternative method are lower than that achieved with permanent mounting.

Iron- hematoxylin stain

Hematoxylin is a natural stain extracted from Hematoxylon campechianum ξύλο. It consists of colorless crystals lacking staining ability, which is then acquired after oxidation and transformation into hematein .

Many hematoxylin staining methods are available. Regressive methods are time consuming and require experience, especially in the destaining step the preparation must be checked several times under the microscope when wet, in order to follow the destaining and differentiation processes. These methods, however, are able to reveal fine cytological details with excellent results. On the other hand, progressive methods are rapid, do not involve destaining , and provide nuclear staining which is sufficient for identifying amoeba species.

Preparation of smears

Specimens fixed in Schaudinn's solution (see trichrome stain)

Specimens fixed in SAF (see trichrome stain)

Specimens fixed in PVA (see trichrome stain)

Staining with iron-hematoxylin gives excellent results with specimens fixed with SAF or Schaudinn's solution.

Iron- hematoxylin stain (Heidenhain's regressive method)

For occasional use (or when few slides are stained at one time), staining can be carried out using a Coplin jar.

For specimens fixed in Schaudinn's solution, proceed from point 1.

For specimens fixed in PVA, proceed from point 1.

For specimens fixed in SAF, proceed from point 2.

1- Dip slides in iodine tincture for 5 min (R14).

2- Place slides in 70% ethanol for 5 min.

3- Place slides in 50% ethanol for 2 min.

4- Wash well with distilled water.

5- Place slides in hematoxylin working solution (R20) for 10 min .

6- Place slides under running tap water (best if tepid) for 10 min.

7- Differentiate slides (one by one) in destaining solution (R21) ή (R22) for 30 s.

8- Wash with tap water and check the wet slide under the microscope (40x objective): if the result is unsatisfactory, replace the slide in destaining solution and then in tap water, until the desired result is achieved. If differentiation in destaining solution is excessive (slide too destained or poor differentiation of parasites), restain with hematoxylin starting from point 5.

9- Place slides under running tap water (best if tepid) for 10 min.

10- Place slides in 95% ethanol for 5 min.

11- Place slides in 100% ethanol for 5 min.

12- Place slides in 100% ethanol for 3 min.

13- Place slides in xylene for 5-10 min.

Mount slides with resinous mounting medium or use the alternative mounting method (see above).

During staining, smears should never dry.

Microscopic examination and interpretation

- Parasites stain blue to black, according to how old the hematoxylin working solution is

- Trophozoitic cytoplasm stains dark blue, gray or black

- Cysts stain dark blue, gray or black, and very often are surrounded by a clear halo which should be considered when measuring cyst size

- Peripheral nuclear chromatin, the karyosome and inclusion bodies (chromatoid bodies, red blood cells and bacteria) stain dark blue, gray or black, as do the fibrils (flagellar remnants) of flagellates

- Charcot-Leyden crystals stain black

- Yeast and Blastocystis stain dark blue, gray or black, the latter with the nuclei darker on the thin rim of cytoplasm

- Glycogen does not stain, but a clear area should be seen.

Examine at least 300 microscopic fields (100x objective) before considering the specimen negative.

Mayer's hematoxylin stain (rapid progressive method)

Albeit not providing the same quality results as the regressive method, the rapid progressive method can be a valid alternative for beginners.

Sample preparation (see above).

1- Place slides in 70% ethanol for 5 min and then in 50% ethanol for 1 min.

2- Wash slides in tap water for 5 min.

3- Quickly wash slides twice in distilled water.

4- Place slides in Mayer's hematoxylin (R23) for 40 s. This time must be checked for every new stock solution.

5- Wash slides with running tap water for 5 min.

6- Place slides for 30 s in a solution of water and ammonia (R24).

7- Place slides in 95% ethanol for 1 min then in new 95% ethanol for 30 s.

8- Dehydrate slides in 100% ethanol for 5 min.

9- Place slides in xylene for 5-10 min.

10- Mount slides using a resinous mounting medium or the alternative mounting method.

During staining, slides should never dry.

With this method, all parasites stain blue.

Notes on trichrome and hematoxylin staining

These staining methods were developed in order to make vegetative forms of intestinal protozoa (amoebae, flagellates) easy to recognize and identify. In specimens containing cysts, the results can be poor due to the presence of collapsed, shrunken, deformed or over-stained forms. This is not the result of bad staining, but it is due to the fact that cysts are poorly fixed in Schaudinn's , PVA and SAF solutions.

During fixation, vegetative forms may be in any one of the different phases of the cell cycle, including the rest period (interphase) and the various phases of nuclear division. Therefore, it is possible to observe forms with 2 nuclei or an apparently deformed nucleus undergoing division (anaphase).

See Trophozoite division (mitosis)

Giemsa and Field stains

These stains are used only on fresh, unfixed specimens (e.g. feces, duodenal aspirates) to identify trophozoites of Dientamoeba fragilis or of flagellates, with excellent results. Other intestinal protozoa are difficult or impossible to identify.

Giemsa stain

1- Spread the specimen on a slide to obtain a thin smear if the feces have a normal consistence, dilute with saline (not with water).

2- Allow the slide to air dry.

3- Fix in 100% methanol for 1 minute.

4- Allow the slide to air dry.

1- Place the slides in 10% Giemsa solution (R33) for 30 minutes.

2- Wash slides well with tap water.

3- Allows the slides to air dry.

Put some drops of immersion oil onto the stained slide, allow the oil to spread evenly and leave for about 10 min. Cover with a coverslip and add one more drop of immersion oil. Then, examine at high power (100x objective). Do not examine specimens without a coverslip because the lens of the objective can be damaged.

- Nuclei stain red-purple or violet

- Cytoplasm stains blue or blue-gray.

Field stain

Sample preparation (see Giemsa stain)

1- Flood slide with 1 ml Field stain B (diluted 1:4 with distilled water).

2- Immediately add 1 ml Field stain A and, with the same pipette, mix the two stains together.

4- Wash slide well with tap water and allow to air dry.

Microscopic examination and interpretation (see Giemsa stain)

Ziehl-Neelsen stain, modified (hot method)

This staining method highlights the acid resistance of intestinal coccidia .

1- The fecal sample is spread on the slide to produce a thin smear. For this procedure, use feces fixed in formalin or SAF or feces that have previously been concentrated (in the last case, to recover Cryptosporidium oocysts , all centrifugation phases must be lengthened by at least 10 min).

2- Allow the slide to air dry.

3- Fix in 100% methanol for 1 minute.

4- Allow the slide to air dry.

5- Flood slide with carbol-fuchsin working solution (R25) for 5 minutes, gently heating on a Bunsen flame or ethanol lamp. Do not boil or dry the staining solution if it dries, add more staining solution to the slide.

6- Decolorize with acid solution (R26) until the stain (red-pink) no longer drips from the slide.

7- Wash slide well with tap water.

8- Flood slide with a methylene blue solution (R27) for 30 s.

9- Wash well with tap water, and allow the slide to air dry.

Microscopic examination and interpretation

Examine slides at low (40x objective) and high (100x objective) power. Oocysts stain pink to red or deep purple.

Cryptosporidium : inside the roundish or oval oocysts , black punctiform or comma-like formations (sporozoites) are seen the bright red color of oocysts is readily recognizable against a blue background.

Isospora belli : in mature oocysts, two red sporocysts are visible, surrounded by a clear halo separating them from the oocyst wall.

Cyclospora : on average only one oocyst out of four becomes stained, taking on a red to pale pink color the other oocysts can be seen as roundish and colorless ghosts . To stain all the oocysts , a safranin method can be used which, however, requires a microwave oven.

Kinyoun stain (cold method)

This stain highlights the acid resistance of intestinal coccidia .

1- Spread stool, formalin- or SAF-fixed specimens, or concentrated samples to obtain a thin smear. (If it is necessary to recover Cryptosporidium oocysts , all centrifugation phases of the concentration method must be lengthened by at least 10 min).

2- Allow the slide to air dry.

3- Fix in 100% methanol for 1 minute.

4- Allow the slide to air dry.

5- Flood the slide with Kinyoun carbol-fuchsin solution (R28) for 5 min.

6- Decolorize with acid solution ((R29) until the stain (red-pink) no longer drips from the slide.

7- Wash slide well with tap water.

8- Flood slide with a methylene blue solution (R30) for 30 s.

9- Wash the slide well with tap water and allow to air dry.

Microscopic examination and interpretation

Examine slides under the microscope at low (40x objective) and high (100x objective) power. Oocysts stain pink to red or deep purple, but less bright than with the modified Ziehl-Neelsen hot method.

Weber's trichrome stain for microsporidia

Παρασκευή

- Prepare a thin smear with 10 μl of feces fixed with 10% formalin or SAF. Specimens that had been concentrated with Ritchie's method cannot be used

- Fix in 100% methanol for 10 minutes and allow the slide to air dry.

Staining procedure

1- Place the slide for 90 minutes in modified trichrome solution (R31)

2- Destain in acid alcohol solution for 5-10 s (R32)

3- Briefly rinse in 95% ethanol for 2-4 s (2 immersions)

4- Dehydrate twice in absolute ethanol for 5 minutes

5- Place slide in xylene for 5 minutes (twice)

6- Mount with resinous mounting medium or the alternative mounting method.

Microscopic examination and interpretation

Carefully examine at least 300 microscopic fields with the oil immersion lens (100x objective). Microsporidia spores are refractile , oval, with reddish-pink walls, but they are difficult to identify due to their small size. Sometimes the content of the spore does not stain at all, while in other cases a reddish-pink diagonal or equatorial band can be seen. The background of the preparation, comprising bacteria and fecal debris, stains weakly green.

To avoid erroneous interpretations, use of a positive control is mandatory.

Giemsa stain for microsporidia

Sample preparation (see Weber's trichrome staining for microsporidia )

Staining procedure

1- Dip fixed slides in Giemsa solution (R33) for 35 minutes

2- Wash with running tap water for 30 s

3- Allow slides to air dry.

Microscopic examination and interpretation

Carefully examine at least 300 microscopic fields with the oil immersion lens (100x objective). When present, microsporidia spores appear either isolated or clustered in groups. The nucleus stains red, the cytoplasm pale blue a clear intracytoplasmic vacuole is visible. To avoid erroneous interpretations, use of a positive control is recommended.


Microscopic imaging without a microscope? New technique visualizes all gene expression from a tissue sample

The 30,000 or so genes making up the human genome contain the instructions vital to life. Yet each of our cells expresses only a subset of these genes in their daily functioning. The difference between a heart cell and a liver cell, for example, is determined by which genes are expressed—and the correct expression of genes can mean the difference between health and disease.

Until recently, researchers investigating the genes underlying disease have been limited because traditional imaging techniques only allow for the study of a handful of genes at a time.

A new technique developed by Jun Hee Lee, Ph.D., and his team at the University of Michigan Medical School, part of Michigan Medicine, uses high-throughput sequencing, instead of a microscope, to obtain ultra-high-resolution images of gene expression from a tissue slide. The technology, which they call Seq-Scope, enables a researcher to see every gene expressed, as well single cells and structures within those cells, at incredibly high resolution: 0.6 micrometers or 66 times smaller than a human hair—beating current methods by multiple orders of magnitude.

"Whenever a pathologist gets a tissue sample, they stain it and look at it under the microscope—it's how they diagnose disease," explained Lee, an associate professor in the Department of Molecular & Integrative Physiology. "Instead of doing that, with our new method, we have made a microdevice that you can overlay with a tissue sample and sequence everything within it with a barcode with spatial coordinates."

Each so-called barcode is made up of a nucleotide sequence—the pattern of A, T, G, an C—found in DNA. Using these barcodes, a computer is able to locate every gene within a tissue sample, creating a Google-like database of all of the mRNAs transcribed from the genome.

"People have been trying to do this with other methods, such as microprinting, microbeads or microfluidic devices, but because of technological limitations, their resolution has been a distance of 20-100 micrometers. At that resolution you can't really see the level of detail needed to diagnose diseases," Lee said.

Lee adds that the technology has the potential to create an unbiased systematic way to analyze genes.

"Whenever we do science, we had to make a hypothesis about the role of two or three genes, but now we have genome-wide data at the microscopic scale and much more knowledge about what's going on inside that patient or model animal's tissue."

This knowledge could be used to provide insight into why certain patients respond to certain drugs while others do not, said Lee.

The team demonstrated the effectiveness of the technique using normal and diseased liver cells, successfully identifying dying liver cells, their surrounding inflamed immune cells and liver cells with altered gene expression.

"This technology actually showed many known pathological features that people have previously discovered but also many genes that are regulated in a novel way that was unrecognized previously," said Lee. "Seq-Scope technology, combined with other single cell RNA sequencing techniques, could accelerate scientific discoveries and might lead to a new paradigm in molecular diagnosis."


Δες το βίντεο: Κινούμενα πρωτόζωα σε μικροσκόπιο (Φεβρουάριος 2023).